高速逆流色谱(high-speedcounter-currentchromatography，简称HSCCC)是新发展起来的一种液液分配色谱技术，与其它色谱技术相比，HSCCC具有很多的优点：能够避免分离样品与固态载体表面因发生化学反应而造成的失活、变性、污染及不可逆吸附等不良情况；能节省昂贵的填料费用，节约溶剂的消耗，运行使用中的后续投入很低；高效、快速、上样量大、回收率高。因此特别适合于从天然产物等复杂混合物中对某些特定成分进行高纯度单体的分离纯化和制备工作。近30年来，随着其理论与技术的日益发展完善，HSCCC在中药活性成分的分离纯化领域已成为最有优势的分离分析方法之一。 中药是中国医药学的瑰宝，数千年来为中华民族的繁衍昌盛和人类的健康发展做出了不可磨灭的贡献。然而，因为中药成分复杂、产品质量缺少量化的标准，另外多数单方及复方制剂的有效物质基础尚不清楚，使得中药在国际市场的销售份额很低(不足3％)。因此，分离制备高纯度药用成分对照品、配合活性跟踪入药部位的设计逐级分离制备活性成分，以规范中药的产业发展，提高中药及其制剂的产品质量，已成为中药现代化过程中刻不容缓的任务，其中建立和改善中药有效成分的提取分离技术是实现中药现代化的核心工作。 本文论述了应用HSCCC，采用优化的实验条件对常用中药黄芩、辛夷、防风、山茱萸和小蓟中的活性成分进行分离纯化的方法。经过分离后，所得化合物经高效液相色谱(highperformanceliquidchromatography，简称HPLC)检测，纯度均大于98％，所得化合物的纯度已达化学对照品的要求。望春花素和望春花黄酮醇苷Ⅰ的化学结构经过核磁共振氢谱(1HNMR)进行了鉴定；其它化合物的化学结构通过核磁共振氢谱(1HNMR)与碳谱(13CNMR)进行了鉴定。该工作可以为黄芩等五味中药的药理研究与开发、中药及其制剂的鉴别及质量控制提供参考。 一、HSCCC分离纯化黄芩中的黄芩苷和汉黄芩苷采用乙酸乙脂—甲醇—1％醋酸(5∶0.5∶5，V/V)作为溶剂体系，以下相作为流动相，采用1.5ml/min的流速，通过一次HSCCC分离，成功地从120mg的黄芩粗提物样品中分离得到了58.1mg的黄芩苷和17.0mg的汉黄芩苷，经过HPLC检测，纯度分别为99.2％和99.0％。化合物的结构经过1HNMR和13CNMR鉴定。 二、HSCCC分离纯化辛夷药材中的望春花素和望春花黄酮醇苷Ⅰ通过对不同的提取方法的考察，建立了中药辛夷粗提物的最佳提取方法。提取得到的样品采用石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水(3∶7∶4∶6，V/V)和石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水(3∶7∶7∶3，V/V)作为溶剂体系，梯度洗脱，建立了一个辛夷药材的HSCCC纯化方法。可以通过一次HSCCC分离，成功的从250mg辛夷粗提物中纯化得到13.0mg望春花黄酮醇苷Ⅰ和65.2mg望春花素，经过HPLC测定，纯度分别为99.8％和99.2％。望春花黄酮醇苷Ⅰ和望春花素化合物的结构经过1HNMR得到鉴定。该法简便快速，是一个制备高纯度望春花素和望春花黄酮醇苷Ⅰ的快速、有效的方法。 三、HSCCC分离纯化防风中的色原酮类成分应用高速逆流色谱法，采用乙酸乙脂—正丁醇—1％醋酸水(1∶4∶6，V/V)和乙酸乙脂—正丁醇—1％醋酸水(5∶0.5∶5，V/V)作为溶剂体系，经过两步HSCCC分离纯化，建立了分离纯化中药防风中活性成分的一种快速简便的方法。成功的从400mg的防风药材粗提物中得到了102.4mg升麻苷，纯度为98.4％；81.6mg5—O—甲基维斯阿米醇苷，纯度为98.7％；31.4mg升麻素，纯度为99.3％和12.7mg亥茅酚苷，纯度为98.2％。化合物的结构经过1HNMR和13CNMR得到鉴定。 四、HSCCC分离纯化山茱萸中的莫诺苷和马钱素利用大孔吸附树脂对山茱萸药材粗提物进行预处理，初步除去样品中的大量杂质，之后采用乙酸乙酯-正丁醇-水(4∶1∶6，V/V)作为溶剂体系，将粗提物进行HSCCC分离纯化，可以通过一次HSCCC分离，成功的从50mg的山茱萸大孔吸附树脂洗脱物中纯化得到了20.7mg莫诺苷和8.5mg马钱素，经过HPLC测定，纯度分别为98.8％和98.6％，化合物的结构经过1HNMR和13CNMR得到鉴定。利用该方法分离纯化中药山茱萸中的莫诺苷和马钱素，简便快速，实验结果令人满意。 五、HSCCC分离纯化中药小蓟中的芸香苷和刺槐素采用大孔吸附树脂法作为高速逆流色谱分离方法的一个辅助方法，将中药小蓟粗提物中的大部分干扰性的杂质预先除去，得到的提取物通过HSCCC进行分离纯化。采用乙酸乙脂—正丁醇—水(5∶1.5∶5)作为溶剂体系，从60mg样品中分离纯化得到15.2mg的芸香苷，纯度为99.0％和13.8mg的刺槐素，纯度为99.4％，化合物的结构经过1HNMR和13CNMR得到鉴定。实验结果令人满意。