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目的: 1. 卵母细胞的老化,不仅影响正常的生育力,而且对辅助生殖技术的施展也有着严重影响,如在体外受精过程中出现获卵率降低,受精率下降,胚胎质量下降,早期妊娠流产可能性増加,后代发育异常等问题。因此卵母细胞老化及其机制的研究在提高卵母细胞质量以及改善ARTs (artificial reproductive technologies)结局中至关重要。本实验通过研究小鼠卵母细胞微管的分布,探索细胞微管分布情况在老化卵子IVF后对其胚胎发育的影响。 2. 为改善老化卵IVF发育效率,提供参考和借鉴。 方法: 1. 本实验以7-8周的ICR雌性小鼠为实验动物,对其促排后,剥离输卵管获取卵母细胞,然后进行IVF; 2. 在10、50、100、150μmol/L浓度的过氧化氢(H2O2)作用下,通过氧化应激诱导小鼠卵母细胞衰老,选出最适浓度来诱导形成老化卵母细胞模型; 3. 以2、4、8细胞胚胎以及囊胚发育率作为卵母细胞质量的主要评价指标; 4. 将两组卵母细胞,2细胞,4细胞阶段胚胎以及囊胚分别进行免疫荧光染色,对比观察两组卵母细胞及各个胚胎发育阶段β-Tubulin微管蛋白的表达及分布情况。 结果: 1. 与10、50、150相比100μmol/L H2O2为诱导卵母细胞老化的最适浓度; 2. 用100μmol/L H2O2处理小鼠卵母细胞3小时,后进行IVF,2细胞,4细胞,8细胞,囊胚形成率均小于正常组(P<0.05); 3. 正常组小鼠卵母细胞内可见微管形成纺锤体,且β-tubulin在胞质内均匀分布,老化组小鼠卵母细胞内未见微管形成纺锤体,且β-tubulin在胞质内呈现不均匀分布的状态,主要分布在细胞核周围,; 4. 正常组小鼠卵母细胞IVF后,2、4细胞时期,β-Tubulin微管蛋白散在分布在每个卵裂球中,且在细胞膜下及卵裂沟处表达增强,形成收缩环。老化组小鼠卵母细胞IVF后,2、4细胞两个卵裂球中的β-Tubulin微管蛋白在细胞质中散在分布,表达量较对照组减少,未见纺锤体形成,没有收缩环; 5. 正常组小鼠卵母细胞IVF后,小鼠囊胚卵裂球中β-Tubulin微管蛋白在各个卵裂球中呈现出不同的分布情况。在部分卵裂球中β-Tubulin微管蛋白形成的纺锤体清晰可见,部分卵裂球中β-Tubulin微管蛋白却呈现出散在分布的状态。老化组小鼠卵母细胞IVF后,小鼠囊胚卵裂球中β-Tubulin微管蛋白在各个卵裂球中表达较正常组少,且未见纺锤体形成。 结论: 1. 用100μmol/L H2O2 处理小鼠卵母细胞,可作为老化卵母细胞模型; 2. 小鼠老化卵母细胞体外受精后2、4、8细胞胚胎及囊胚形成率均下降; 3.小鼠老化卵母细胞的β-Tubulin微管蛋白分布紊乱,阻碍了卵裂球及囊胚内卵裂细胞纺锤体的形成,也阻碍其在卵裂沟处收缩环的形成。