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目的:通过观察氧化苦参碱(Oxymatrine,OM)对亚砷酸钠(Na As O2)致人胎肝细胞株L-02细胞损伤过程中内质网应激和细胞凋亡的影响,探讨其对砷致肝细胞损伤保护性作用的可能机制,为砷中毒肝损伤患者药物防治提供理论基础。方法:(1)体外培养L-02细胞,MTT法测定不同浓度Na As O2(25、50、100、200、500μmol/L)作用24h后对L-02细胞增殖的影响,生物化学法检测细胞培养液中谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)的水平,确定合适的Na As O2实验浓度;选择合适的Na As O2染毒浓度作用0h、6h、12h、18h、24h、36h,生物化学法检测细胞培养液中ALT、AST的水平,MTT法测定对L-02细胞增殖的影响,流式细胞仪检测不同时间点L-02细胞凋亡率;MTT法测定不同浓度OM(25、50、100、200、500、1000μg/ml)对L-02细胞增殖的影响。(2)体外培养L-02细胞,随机分为:对照组、OM(200μg/ml)组、Na As O2(100μmol/L)组、Na As O2加不同浓度OM(50、100、200μg/ml)组,生物化学法检测细胞培养液中ALT、AST的水平;蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测培养各组细胞葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78,GRP78)和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CCAAT/enhancer-binding protein homologous protein,CHOP)蛋白表达水平;流式细胞仪检测各组细胞凋亡率。(3)体外培养L-02细胞,随机分为:对照组、OM(200μg/ml)组、Na As O2(100μmol/L)组、Na As O2加OM(200μg/ml)组、Na As O2加内质网应激特异性抑制剂4-苯基丁酸(4-PBA,5mmol/L)组、二硫苏糖醇(DTT,内质网应激特异性诱导剂,2.5mmol/L)组、DTT加OM(200μg/ml)组,生物化学法检测细胞培养液中谷丙转氨酶ALT、AST的水平;蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测培养各组细胞GRP78和CHOP蛋白表达水平;流式细胞仪检测各组细胞凋亡率。结果:(1)随着Na As O2浓度升高培养基中AST、ALT水平逐渐升高,L-02细胞的存活率逐渐下降,呈剂量依赖性,浓度为100μmol/L时,L-02细胞的存活率为76.55%;不同时间点培养基中AST、ALT水平,Na As O2对L-02细胞增殖的抑制及细胞晚期凋亡/坏死率随暴露时间延长而升高,呈时间依赖性,而细胞早期凋亡率在18h时达到最高,随后略有降低;在200μg/ml以下,OM对L-02细胞增殖无影响(P>0.05)。(2)OM组与对照组相较,各项指标均无显著差异;与对照组及OM处理组比较,Na As O2组细胞培养上清液中AST、ALT水平、细胞凋亡率、GRP78及CHOP蛋白表达水平显著升高(P<0.05);而不同浓度OM干预后,上述指标均有不同程度下降(P<0.05),其改善作用呈剂量依赖性,以OM(200μg/ml)效果最佳。(3)OM组各项指标与对照组相比,均无明显差异。与对照组相比,Na As O2组L-02细胞AST、ALT水平和细胞凋亡率显著增高(P<0.05),4-PBA、OM可显著抑制砷致L-02细胞损伤和细胞凋亡。Na As O2组内质网应激相关指标GRP78、CHOP蛋白表达较对照组显著增高,差异有统计学意义(P<0.05),且可被内质网应激特异性抑制剂4-PBA所逆转(P<0.05)。OM亦可抑制Na As O2诱导的GRP78、CHOP蛋白表达上调(P<0.05)。与对照组相比,DTT组ALT、AST水平,细胞凋亡率,GRP78、CHOP蛋白表达显著增高(P<0.05),OM则可降低DTT诱导的L-02细胞内质网应激相关蛋白的表达、细胞损伤和细胞凋亡(P<0.05)。结论:砷可致人胎肝细胞株L-02细胞发生损伤并诱导内质网应激,OM对砷致人胎肝细胞株L-02细胞损伤的保护,至少部分通过抑制细胞内质网应激和减少细胞凋亡而发挥作用。