论文部分内容阅读
第一部分兔腹主动脉易损斑块模型制备方法及SWE的评估价值[目 的]二维超声及实时剪切波弹性成像(SWE)结合病理学检查评估不同造模方式制备的兔腹主动脉粥样斑块,探索较为理想的兔腹主动脉粥样硬化易损斑块模型方法,为进一步对斑块模型进行试验性治疗研究提供实验基础。[方法]选取48只2.0-2.5Kg的4月龄雄性新西兰大耳白兔,随机平均分为四个组(每组12只):实验1组:采用高脂喂养+腹主动脉球囊拉伤术;实验2组:采用高脂喂养+注射小牛血清白蛋白;实验3组:采用高脂喂养+腹主动脉球囊拉伤术+注射小牛血清白蛋白;对照组:采用单纯高脂饲料喂养。所有兔都进行高脂喂养,在12周末对各实验组进行相应的球囊拉伤和免疫损伤操作。于0周、12周末、16周末、20周末对所有兔进行超声观察、SWE的评估,并在20周末进行病理学检查确定斑块成分及其易损性。[结 果]1.模型存活情况:48只实验兔存活31只,死亡17只。2.二维超声评价兔腹主动脉内-中膜厚度(IMT):同一分组的IMT均随着喂养周数逐渐增厚(均P<0.05);16周末及20周末,在加入球囊拉伤、免疫损伤后,实验1、2、3组的IMT比单纯高脂饲料喂养增厚更明显(均P<0.05)。3.二维超声评价兔腹主动脉粥样斑块类型及数量:共制备动脉粥样硬化斑块76个。采用高脂喂养+腹主动脉球囊拉伤术+注射小牛血清白蛋白造模形成的斑块数量最多(P<0.05),在进行球囊拉伤和免疫损伤后,更容易形成Ⅰ型、Ⅱ型斑块(均P<0.05)。4.兔腹主动脉粥样斑块SWE检查:斑块的Mean、Min、Max的杨氏模量值:Ⅳ型>Ⅲ型>Ⅱ型>Ⅰ型,斑块的杨氏模量值随着斑块类型等级逐级增加(均P<0.05)。5.Ⅰ～Ⅳ型斑块结合SWE测值绘制ROC曲线求Mean、Min、Max的最佳诊断阈值:Mean(29.75kPa、40.4 kPa、54.1 kPa),Min(13.75kPa、23.2kPa、34.1kPa),Max(39.75kPa、61.4kPa、84.7kPa)。6.病理检查结果结合SWE测值绘制ROC曲线求最佳截断值:Mean、Min、Max值的曲线下面积在0.7～0.9之间,易损斑块与非易损斑块的Mean、Min、Max最佳截断值分别是 39.45kPa、23.2 kPa、60.75 kPa。[结 论]应用高脂喂养+腹主动脉球囊拉伤术+注射小牛血清白蛋白可制备较为理想的兔腹主动脉粥样硬化易损斑块模型,同时二维超声结合SWE能够定量、重复、可持续的观察和评估斑块的易损性,为进一步对斑块模型进行试验性治疗研究提供了较好的实验基础。第二部分携IL-6单克隆抗体的靶向微泡破坏技术对斑块稳定性的研究[目的]SWE结合超声靶向微泡破坏技术(UTMD)评估携白细胞介素-6(IL-6)单克隆抗体靶向造影剂在增加动脉粥样硬化斑块稳定性中的作用。[方法]选取40只动脉粥样硬化斑块的雄性新西兰大耳白兔(具体方法见第一部分)平均分为四组(每组10只):单纯辐照组:采用生理盐水代替造影剂;单纯裸泡组:采用裸微泡进行造影;靶向治疗组:采用携IL-6单克隆抗体的靶向微泡进行造影;空白对照组:不做任何处理。于第20-28周间每两周对兔进行超声靶向微泡破坏技术(UTMD)治疗,然后在第20周、第24周、第28周对40只兔子腹主动脉IMT及动脉粥样硬化斑块S WE硬度情况进行监测。同时对治疗期间兔血清IL-6及血脂(TG、TC、LDL-C、HDL-C)情况进行检测。最后,病理学检查确定靶向治疗后的斑块成分及其易损性。[结 果]1.平行板流动腔实验检测微泡黏附效率:生物素-亲和素桥接法可以将USphereTM造影剂与配体(IL-6单克隆抗体)紧密连接,在剪切力0.2dyn/cm2时靶向微泡特异粘附效能最大(静止微泡的计数最多)。2.二维超声评价兔腹主动脉IMT:靶向治疗组IMT随着治疗周期的延长,逐渐变薄(P<0.05)。3.兔腹主动脉斑块的SWE结果分析:经过治疗,靶向治疗组斑块的弹性模量平均值呈上升趋势(P<0.05)。4.兔血清IL-6含量分析:在停止高脂饲养后,所有兔的血清IL-6的水平均在逐渐下降(均P<0.05);在第24周及第28周靶向治疗组兔血清IL-6的水平较空白对照组、单纯裸泡组、单纯辐照组下降更明显(均P<0.05)。5.血脂检测结果分析:随着常规饲料喂养的进程,所有兔的各项血脂指标(TC、TG、LDL-C、HDL-C)含量均逐渐降低(均P<0.05)。6.兔腹主动脉病理学观察:靶向治疗后HE染色靶向治疗组兔腹主动脉内-中膜内泡沫细胞明显比对照组少;Masson染色靶向治疗组胶原纤维比对照组少;油红O染色靶向治疗组红染脂质细胞厚度明显比对照组薄,红染区域面积明显比对照组小。[结 论]“生物素-亲和素”桥接法可成功制备携IL-6单抗的靶向微泡,IL-6单克隆抗体和微泡牢固结合。通过UTMD技术介导携IL-6单克隆抗体造影剂靶向治疗,兔血清中的急性炎症因子IL-6的含量减少,兔腹主动脉IMT变薄、易损斑块的硬度明显增加,因此超声靶向造影技术是一种对兔腹主动脉粥样硬化易损斑块有较好疗效的治疗手段,有望成为临床提高斑块稳定性的新方法。