【摘 要】
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目的:近年来,肋软骨因其独特的优势而被广泛应用于临床。本实验主要采用组织学及分子生物学的研究方法,通过对比不同形态人肋软骨自体游离移植后的转归,对于临床中肋软骨形态的选择具有一定的导向作用。方法:根据纳入和排除标准共纳入先天性小耳畸形患者8例,男女比例为3:1平均年龄是15.7岁（15.7±1.7）。收集耳廓再造Ⅰ期术中耳廓支架雕刻后剩余的自体软骨,将其制作成不同形态移植于胸壁皮下,耳廓再造Ⅱ期收
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目的:近年来,肋软骨因其独特的优势而被广泛应用于临床。本实验主要采用组织学及分子生物学的研究方法,通过对比不同形态人肋软骨自体游离移植后的转归,对于临床中肋软骨形态的选择具有一定的导向作用。方法:根据纳入和排除标准共纳入先天性小耳畸形患者8例,男女比例为3:1平均年龄是15.7岁（15.7±1.7）。收集耳廓再造Ⅰ期术中耳廓支架雕刻后剩余的自体软骨,将其制作成不同形态移植于胸壁皮下,耳廓再造Ⅱ期收集不同形态的自体软骨标本。分组:以游离移植前的自体软骨为对照组（A组）,游离移植6个月的自体软骨为实验组（Ba组、Bb组）,根据不同厚度分为3组:2mm厚（Ba1组）、4mm厚（Ba2组）、6mm厚（Ba3组）,根据不同形状分为:块状（Bb1组）、颗粒状（Bb2组）。初步通过肉眼观察不同组肋软骨移植后大体上是否发生改变,进一步通过HE染色、番红固绿染色、天狼猩红染色在光学显微镜下观察不同组软骨细胞的活性和形态、软骨细胞数量、软骨基质中糖胺聚糖和Ⅱ型胶原纤维的分布情况,电子扫描电镜进一步观察不同组软骨陷窝形态是否饱满、软骨细胞是否完整、软骨基质排列是否整齐,最后通过RT-qPCR检测软骨基质中GAG链合成相关基因mRNA的表达和CollagenⅡmRNA的表达、WB检测软骨基质中CollagenⅡ蛋白表达。统计数据,分析比较A组、Ba组、Bb组自体肋软骨在组织学和分子生物学上是否存在差异。结果:（1）大体观察结果:Ba1组、Ba2组、Ba3组、Bb1组软骨移植后无明显变化,Bb2组软骨移植后大部分无明显变化,小部分边缘变钝;（2）组织学结果:（1）A组、Ba1组、Ba2组、Ba3组间软骨细胞计数有差异（F=8.377,P＜0.001）,组间两两比较,与A组相比,Ba1组和Ba2组软骨细胞计数均显著降低（P＜0.01）,Ba3组软骨细胞计数下降不显著（P＞0.05）,Ba1组、Ba2组和Ba3组两两比较软骨细胞计数下降不显著（P＞0.05）;（2）A组、Bb1组、Bb2组组间软骨细胞计数有差异（F=17.174,P＜0.001）,组间两两比较,与A组相比,Bb1组和Bb2组软骨细胞计数均显著降低（P＜0.001）,Bb2组软骨细胞计数较Bb1组显著降低（P＜0.05）。（3）RT-qPCR检测结果:（1）A组、Ba1组、Ba2组、Ba3组组间Galnac4s6st mRNA表达无统计学意义（F=0.688,P=0.566）;（2）A组、Bb1组、Bb2组组间Galnac4s6st的表达有差异（F=21.964,P＜0.001）。组间两两比较,与A组相比,Bb1组Galnac4s6st mRNA表达增加（P=0.028）,Bb2组Galnac4s6st mRNA表达降低（P=0.004）;与Bb1组相比,Bb2组Galnac4s6st mRNA表达降低（P＜0.001）。（3）A组、Ba1组、Ba2组、Ba3组组间CollagenⅡmRNA表达无统计学意义（F=1.243,P=0.303）;（4）A组、Bb1组、Bb2组组间CollagenⅡmRNA表达无统计学意义（F=2.927,P=0.065）。（4）WB检测结果:（1）A组、Ba1组、Ba2组、Ba3组间CollagenⅡ蛋白相对表达量平均值无显著差异（F=1.615,P=0.212）,差异无统计学意义;（2）A组、Bb1组、Bb2组组间CollagenⅡ蛋白相对表达量无显著差异（F=0.283,P=0.757）,差异无统计学意义。结论:自体肋软骨移植6个月后,软骨细胞计数随软骨厚度和尺寸增加而增加,GAG含量随软骨尺寸增加而增加。软骨的厚度和形状对移植后软骨的微细结构确实产生了影响,但对软骨基质中mRNA和蛋白的表达影响小,在临床应用中可将肋软骨制作成多种形态进行移植。
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