【摘 要】
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目的:探讨细胞自噬在肾综合征出血热(Hemorrhagic Fever with Renal Syndrome,HFRS)致病中的作用,并进一步了解细胞自噬在汉滩病毒(Hantaan virus,HTNV)复制中的分子机制。从而为HTNV致病机制的研究和HFRS的防控提供依据。方法:1.人群研究:收集河北省2018年HFRS患者的基本信息和抗凝血标本。将符合标准的50名患者纳入HFRS组,在非HF
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目的:探讨细胞自噬在肾综合征出血热(Hemorrhagic Fever with Renal Syndrome,HFRS)致病中的作用,并进一步了解细胞自噬在汉滩病毒(Hantaan virus,HTNV)复制中的分子机制。从而为HTNV致病机制的研究和HFRS的防控提供依据。方法:1.人群研究:收集河北省2018年HFRS患者的基本信息和抗凝血标本。将符合标准的50名患者纳入HFRS组,在非HFRS患者(健康人群)中进行成组匹配,选择与患病组年龄、性别相匹配的50名健康人作为对照组。ELISA法检测两组人群血清中Beclin-1蛋白的表达水平,应用两样本Mann-Whitney U检验进行分析,比较两组人群Beclin-1表达差异。2.细胞学实验:(1)HTNV感染对细胞自噬的影响:利用HTNV分离株感染Vero E6细胞,用未染毒细胞相同条件下培养作为对照组,采用质粒转染、免疫荧光、Western blot等方法分别检测染毒组和对照组的自噬水平变化,并确定HTNV复制的场所。(2)改变细胞自噬水平对HTNV复制的影响:分别用自噬促进剂和抑制剂对细胞自噬水平进行调控后,感染HTNV,将细胞分为染毒组、促进组和抑制组,用实时荧光定量RT-PCR检测不同组别的HTNV复制水平。结果:1.HFRS组人群血清中的Beclin-1蛋白水平明显高于对照组(u=294.00,P<0.05)。2.染毒组细胞外源LC3蛋白的点状聚集水平明显高于对照组,细胞染毒后36 h和48 h的内源LC3-Ⅱ蛋白表达水平明显高于对照组(t=-2.12,P<0.05;t=-1.64,P<0.05)。3.HTNV特异性蛋白在自噬体内大量存在,自噬体是HTNV复制的重要场所。4.上调细胞自噬水平后可增强HTNV复制水平(t=-4.33,P<0.05),抑制组的HTNV复制量与对照组无差别(t=-1.33,P>0.05)。结论:1.与健康人群相比,HFRS患者体内细胞自噬水平增高。2.HTNV感染可以诱导细胞发生细胞自噬,且自噬体是HTNV复制的重要场所。3.细胞自噬促进HTNV的复制;HTNV抑制自噬降低。
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