土荆芥挥发油及其主要成分对人乳腺癌细胞(MCF-7)的体外抗肿瘤活性

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土荆芥(Chenopodium ambrosioides L.)为藜科一年生或多年生草本植物,原产于热带美洲,现在分布广泛,如分布在热带、亚热带和温带地区。土荆芥挥发油含有生物活性物质,在医药上具有广阔的开发应用前景。本研究运用GC-MS单点法和气相色谱法分别测定了土荆芥挥发油中两个主要成分对聚伞花素(p-Cymene)和α-萜品烯(α-terpinene)的含量,并采用MTT法、Live/dead细胞荧光染色法、流式细胞术分析法、分光光度计法以及透射电子显微镜观察法,研究了土荆芥挥发油、对聚伞花素和α-萜品烯对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、细胞活性以及抗氧化系统的影响,初步探讨了土荆芥挥发油及其主要成分的体外抗肿瘤活性。结果如下:(1)土荆芥挥发油中对聚伞花素的含量为156mg/mL;α-萜品烯在土荆芥挥发油中的含量为13.5%。(2)土荆芥挥发油、对聚伞花素和α-萜品烯对MCF-7细胞具有明显的细胞毒性,对MCF-7细胞具有致死作用,并且呈现浓度依赖性。随着处理浓度增加,MCF-7细胞死亡现象加剧,其中50μg/mL挥发油处理中MCF-7细胞死亡的现象最显著;MTT法结果显示,土荆芥挥发油、对聚伞花素和α-萜品烯对MCF-7细胞增殖具有抑制效应。随着土荆芥挥发油处理浓度升高,其对MCF-7细胞增殖的抑制率逐渐增大;在对聚伞花素处理组和α-萜品烯处理组中,低浓度处理组对MCF-7细胞增殖的抑制效应与对照差异不显著,而高浓度处理组具有显著的抑制效应,且对聚伞花素对MCF-7细胞的平均抑制率高于α-萜品烯。与挥发油相比,两个主要成分对MCF-7细胞增殖的抑制效应较小;流式细胞仪分析结果显示挥发油、对聚伞花素和α-萜品烯干扰了MCF-7细胞的细胞周期。与对照组相比,处理组细胞周期各时相细胞数量的比例发生变化,G1期细胞比例增加,而S期细胞比例减少。三个处理组的S期细胞数量从多到少依次为α-萜品烯处理组、对聚伞花素处理组和挥发油处理组。此外,在土荆芥挥发油和其主要成分作用下,MCF-7细胞的染色体倍数发生变化。与对照相比,二倍体细胞比例减少,四倍体细胞比例增加,且出现非整倍体细胞。三个处理组中,α-萜品烯处理组的二倍体细胞比例最大,对聚伞花素处理组次之,挥发油处理组最少。上述结果表明,土荆芥挥发油及其主要成分阻滞了MCF-7细胞的细胞周期,从而抑制了细胞增殖。(3)随着土荆芥挥发油、对聚伞花素和α-萜品烯处理液浓度升高,MCF-7细胞的SOD相对活性逐渐降低,CAT相对活性逐渐升高,MDA相对含量呈现先增加后降低的趋势,并且整体与对照差异显著(P<0.05),表明土荆芥挥发油及其主要成分干扰了MCF-7细胞的抗氧化系统。(4)土荆芥挥发油及其两个主要化合物对MCF-7细胞具有直接杀伤作用,并造成MCF-7胞浆内出现空泡,细胞核破碎,细胞肿胀破裂,细胞完整性被破坏,内容物大量外泄。综上所述,土荆芥挥发油及其两个主要成分对聚伞花素和α-萜品烯通过阻滞细胞周期,抑制细胞体外增殖,干扰细胞的抗氧化系统,破坏细胞结构,对MCF-7细胞具有显著的致死效应,表现出显著的体外抗肿瘤活性。土荆芥挥发油及其主要成分的体外抗肿瘤活性以挥发油最为明显,对聚散花素次之,α-萜品烯最弱。
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