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转基因番茄华番一号从1996以来已在我国湖北、广西、贵州、新疆、江苏等21个省(自治区)大面积推广应用,建立其定量检测方法很有必要。
本研究研究并建立了转基因番茄“华番一号”筛选和特异性的定性、定量PCR检测方法。首先,利用CTAB法和试剂盒法提取样品DNA;其次,确定番茄PG基因为内标准基因,以转入基因的载体与PG基因的相邻序列为目的序列,在设计合适的引物后建立了定性和定量检测的PCR反应体系;最后建立了“华番一号”番茄的特异性定性、定量PCR检测系统。在所建立的PCR检测体系中,定性PCR筛选、实时定量PCR方法和特异性检测的检测极限为6个拷贝,通过对转基因“华番一号”番茄种子混合样品含量的检测,证明了该体系可以有效地用于转基因番茄“华番一号”的筛选和特异性的定性和定量PCR检测。