青蒿琥酯(Artesunate,ART)是我国自主研发的青蒿素的衍生物成分。与青蒿素相比,其剂型多样,方便服用,比青蒿素具有更高的效价。口服后能够在体内生成二氢青蒿素进而表现出一定的药理作用,发挥高效的抗疟作用,且毒性较小。近年来青蒿琥酯表现出良好的抗肿瘤活性及较低的毒副作用,得到了国内外药学研究工作者的广泛关注。但由于其水溶性较差,并且具有明显的首过效应和肝药酶诱导作用,导致生物利用度较低,限制了其临床应用。在本课题研究中,我们使用具有良好生物相容性和生物降解性的高分子材料透明质酸(Hyaluronic acid,HA)作为药物载体,通过化学反应制备HA-ART纳米粒并进行表征。之后通过一系列的体外细胞实验考察了HA-ART对乳腺癌细胞的抑制作用及其作用机制。研究结果表明,青蒿琥酯纳米载药系统不仅能够增加ART在水溶液中的溶解性、延长药物半衰期,还可提高生物利用度,增加药物对癌细胞的毒性作用。1、本课题设计的透明质酸-青蒿琥酯自组装纳米粒(HA-ART)主要通过以下方法制备获得:将青蒿琥酯与己二酸二酰肼修饰过的透明质酸反应得到HA-ART结合物;将制备的HA-ART结合物取适量溶于蒸馏水中,在室温下搅拌超声溶解,使其在水中分散均匀,自组装形成亲水性的HA-ART纳米粒。通过核磁共振氢谱和红外光谱对其进行结构表征,确证了目标产物的合成。使用激光粒度仪、电位分析仪及透射电镜考察HA-ART纳米粒的粒径电位和形貌,结果显示该纳米粒平均粒径为171.6nm,界面电势为-16.1mv,PDI为0.199,表明HA-ART纳米粒粒径大小均一,分散性良好,表面光滑无粘连,并且具有较好的稳定性。通过紫外吸收考察了HA-ART中青蒿琥酯的药物含量为20%。体外释放研究表明:聚合物纳米粒HA-ART具有较好的释放特性,无明显突释行为。2、使用制备的HA-ART纳米粒进行实验,研究HA-ART纳米粒对两种乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231以及人正常乳腺细胞MCF10A活力及增殖的影响。结果表明:HA-ART纳米粒能在体外显著抑制乳腺癌细胞的活力与增殖能力,但对MCF10A细胞的生长没有明显影响。3、采用划痕愈合、细胞迁移、细胞侵袭实验检测HA-ART对乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231迁移和侵袭能力的影响。结果显示:与对照组相比,HA-ART组细胞的迁移和侵袭能力显著减弱。细胞周期分布实验结果显示HA-ART可阻滞MCF-7和MDA-MB-231细胞于G2/M期,并且周期相关蛋白结果与流式实验结果一致。采用流式细胞术、Western blot及Tunel细胞凋亡实验考察HA-ART对MCF-7和MDA-MB-231细胞凋亡和自噬影响;结果表明:HA-ART可诱导细胞发生凋亡和自噬,且HA-ART作用均较ART组显著增强。综上,我们成功制备了HA-ART纳米粒,它可作为优势递药系统,用于增强ART的抗肿瘤活性,实现乳腺癌的靶向治疗。