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原发性肝癌是全世界最常见的恶性肿瘤之一,肿瘤死亡率居全球第三位,肝细胞性肝癌是原发性肝癌中最常见的一种类型,多数患者发现时已处于病程中晚期,缺乏有效的治疗药物。荜茇酰胺是从长柄胡椒中提取的具有生物活性的小分子酰胺类化合物,近期研究发现其对多种肿瘤细胞具有选择性杀伤作用,是潜在的抗肿瘤药物,但是其对肝癌细胞的作用和机制研究鲜见报道。本课题用荜茇酰胺处理肝癌细胞系(HepG2、Huh7和LM3)和小鼠原代培养肝细胞,通过MTT、PI染色以及流式细胞仪检测,发现荜茇酰胺能杀伤肝癌细胞(IC50为10-20μM),对正常肝细胞无明显作用。同时,研究发现荜茇酰胺在低浓度(<10μM)时能有效抑制肝癌细胞的迁移/侵袭,提示荜茇酰胺可能对晚期肝癌有治疗作用。进一步研究表明,荜茇酰胺能诱导肝癌细胞内ROS堆积,激活内质网应激反应和下游的MAPKs信号通路。抗氧化剂NAC能拮抗荜茇酰胺杀伤肝癌细胞以及抑制肝癌细胞迁移的作用,而内质网应激抑制剂4-PBA和MAPKs信号通路抑制剂SP600125(JNK抑制剂)、SB203580(P38抑制剂)和U0126(Erk抑制剂)仅拮抗荜茇酰胺抑制肝癌细胞的迁移,提示内质网应激和MAPKs信号通路参与了荜茇酰胺对肝癌细胞迁移的抑制作用。Western blot结果证明,荜茇酰胺处理肝癌细胞时,抑制ROS可显著减少内质网应激和MAPKs信号通路相关蛋白的表达,抑制ROS和内质网应激均可抑制MAPKs信号通路的激活。细胞免疫荧光结果证明,荜茇酰胺处理肝癌细胞时,ROS,内质网应激,MAPKs信号通路抑制剂均可显著抑制CHOP的表达,提示CHOP是ROS-ER-MAPKs通路下游信号分子。Si-RNA结果证明CHOP参与了肝癌细胞迁移,并且是荜茇酰胺的一个作用靶点。最后,通过小鼠皮下移植肝癌细胞(H22)构建荷瘤模型,用荜茇酰胺干预,发现荜茇酰胺能有效抑制肝癌细胞在动物体内生长,并且激活ER-MAPKs-CHOP信号通路。综上所述,荜茇酰胺能选择性杀伤肝癌细胞并通过ROS-ER-MAPKs-CHOP信号通路抑制肝癌细胞的迁移/侵袭。我们的实验结果为肝细胞性肝癌的药物治疗和作用机制研究提供了新的思路。