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目的:结合长链非编码RNA(long noncoding RNA,lnc RNA)芯片及生物信息学方法,探索沉默信息调节因子2相关酶1(Sirtuin 1,SIRT1)对人小梁网细胞(human trabecular meshwork cells,HTMCs)细胞外基质的可能分子调控机制,以筛选出青光眼的潜在治疗靶点。方法:1.构建SIRT1过表达慢病毒,检测其HTMCs的最佳感染复数(multiplicity of infection,MOI),将SIRT1过表达慢病毒和阴性对照慢病毒按照最佳MOI分别感染HTMCs后,进行lnc RNA芯片检测。2.SIRT1激动剂-白藜芦醇(resveratrol,RSV)和溶剂对照二甲基亚砜(dimethylsulfoxide,DMSO)分别处理HTMCs,进行lnc RNA芯片检测。3.对差异性lnc RNAs进行信息学分析,用实时定量PCR验证差异性lnc RNAs。4.检测氧化应激下HTMCs细胞活性、细胞凋亡和细胞外基质(extracellular matrix,ECM)表达的影响5.分别检测氧化应激下RSV对HTMCs中纤维连接蛋白(fibronectin,FN)和在氧化应激状态下HTMCs过表达SIRT1对细胞中FN表达的影响。6.采用Transwell实验和CCK8法检测氧化应激下RSV对HTMCs的迁移能力和活性的影响。实验分组:正常组、RSV+DMSO组、DMSO组、H2O2组、H2O2+RSV+DMSO组、H2O2+DMSO组。7.采用Transwell法和CCK8法检测氧化应激下SIRT1对HTMCs的迁移能力和活性的影响。实验分为以下6组:正常组、H2O2组、H2O2+Lv-SIRT1-OE(过表达)组、H2O2+Lv-GFP组、H2O2+RSV+DMSO组、H2O2+DMSO组。8.通过基因芯片分析筛选出差异性表达的linc00963。SIRT1过表达慢病毒感染HTMCs或RSV处理HTMCs后检测linc00963、微小RNA-1(micro RNA-1,mi R-1)和FN的表达。沉默linc00963,检测mi R-1以及FN的表达。9.统计学分析:两组间比较采用独立样本t检验。多组间比较采用方差齐性检验和单因素方差分析。P<0.05时,差异具有统计学意义。结果:1.差异lnc RNA表达谱显示:与对照组相比,SIRT1慢病毒感染HTMCs后引起636个lnc RNAs上调和2246个lnc RNAs下调(|foldchange|>2,P<0.05)。RSV-DMSO处理HTMCs后1048个lnc RNAs上调和1320个lnc RNAs下调(|foldchange|>2,P<0.05)。结合两个芯片结果,GO分析显示:SIRT1和RSV对细胞外基质、细胞代谢、增殖、凋亡等有调节作用。KEGG生物学通路分析显示:SIRT1慢病毒组芯片差异lnc RNAs主要包括Notch信号通路、MAPK信号通路、酪氨酸酶相关蛋白(tyrosinase related proteins,TRP)通道的炎症介质调节以及细胞外基质受体的相互作用等19个通路中富集;RSV-DMSO组芯片差异lnc RNAs主要包括MAPK信号通路、细胞凋亡、Fox O信号通路、m TOR信号通路、p53信号通路、PI3K-PKB信号通路等30个通路中富集。2.氧化应激下HTMCs中FN的表达升高,胶原蛋白Ⅰ型、层粘连蛋白等ECM表达也升高(P<0.001)。3.氧化应激下RSV能降低HTMCs中FN的表达(P<0.001),在氧化应激下的HTMCs中过表达SIRT1也能降低HTMCs中FN的表达(P<0.001)。4.Transwell实验结果显示:在正常组、RSV+DMSO组、DMSO组、H2O2组、H2O2+RSV+DMSO组、H2O2+DMSO组中,每孔细胞迁移的数目分别为298±18、257±37、291±20、151±20、267±26、144±21,H2O2+RSV+DMSO组与H2O2组和H2O2+DMSO组均有差异(P<0.001);CCK8法结果显示,H2O2+RSV+DMSO组与H2O2组和H2O2+DMSO组相比,差异均有统计学意义(P<0.01)。5.在正常组、H2O2组、H2O2+Lv-SIRT1-OE组、H2O2+Lv-GFP组、H2O2+RSV+DMSO组、H2O2+DMSO组这六组中,Transwell实验中每孔细胞迁移数目分别为436±73、254±25、510±51、327±46、405±63、246±56,H2O2+Lv-SIRT1-OE组分别与H2O2组和H2O2+Lv-GFP组差异均有统计学意义(P<0.01);CCK8法结果显示,H2O2+Lv-SIRT1-OE组分别与H2O2组和H2O2+Lv-GFP组相比差异均有统计学意义(P<0.01)。6.SIRT1活性增强(RSV处理)或表达增加时,mi R-1水平显著上升,SIRT1活性增强(RSV处理)或SIRT1过表达后linc00963水平以及FN的m RNA和蛋白水平下降。当沉默linc00963后,mi R-1水平明显升高,而FN的m RNA水平以及蛋白水平则显著降低。结论:1.通过基因芯片技术筛选出在HTMCs中过表达SIRT1以及RSV刺激HTMCs后差异表达的lnc RNAs,对阐明SIRT1如何保护HTMCs的机制和信号通路提供信息。2.SIRT1降低氧化应激对HTMCs增殖活性以及迁移的影响。3.SIRT1被RSV激活或过表达SIRT1能下降linc00963以及FN的表达,促进mi R-1的表达;4.筛选出来的linc00963,可能通过调节mi R-1的表达,从而影响FN的表达,这将可能成为青光眼新的潜在治疗靶点。