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本试验用常规PCR方法从七株黄单胞菌(Xanthomonas spp.)菌株的基因组DNA中克隆得到8个基因片段，通过测序、同源性比较和进化树的构建，对其进化关系做了初步研究。 本试验旨在通过对不同黄单胞菌菌株α-淀粉酶基因克隆、测序和进化研究，为本教研室的两个科研课题：“用DNA shuffling技术构建高产α-淀粉酶基因”和“细菌α-淀粉酶基因体外进化研究”积累基本数据、进行初步研究和探索。 本试验根据Genbank已公布的黄单胞菌α-淀粉酶基因的核苷酸序列由引物设计软件Premier Primer 5.0辅助设计了一对引物(primer Ⅰ & primer Ⅱ)，以pBluescript Ⅱ KS+和pUC18/pUC19质粒为载体，用常规的PCR方法从Xanthomonas campestris pv. Malvacearum (Smith) Dye等七株黄单胞菌(Xanthomomas spp.)的基因组DNA中克隆得到8个基因片段，分别命名为zhyf001～zhyf008。 设计引物时，上下游引物5’端分别添加了Kpn Ⅰ和BamH Ⅰ酶切位点，克隆得到的基因片段和质粒载体都用Kpn Ⅰ和BamH Ⅰ进行双酶切后，进行酶连、转化、筛选得到阳性重组子，经过蓝白斑验证、单酶切验证、双酶切验证、PCR验证等一系列的验证后进行测序。 从测序结果看，只有zhyf006是α-淀粉酶基因全序列，其余是其他基因全序列或部分序列。测序后的序列经Vecscreen工具去载体后，进行Genbank网上申请，得到8个基因号，与zhyf001～zhyf008分别对应为AY247106、AY220755、AY220754、AY216525、AY216526、AY220756、AY220753、AY220752。 利用vector NTI 6.0软件，对所克隆的序列用相邻接点法(NeighborJo i n i ng州J） method）进行多序列比对，分析其同源性，并构建基因进化树。 从引物和基因序列的比对分析结果看，Zhyf006序列与上下游引物的配对比例分别为 S4．2％和 100％；Zhyf007序列与上下游引物配对的比例分别为94．7％和100％；Zhyf001～Zhyf005基因序列的正链和负链均与上游弓物序列100％配对，但找不到下游引物序列的互补序列；Zhyf008序列与上游引物序列 100％配对，但也找不到与下游引物序列的互补序列。 由于本试验所克隆的基因较少，所以比对过程中又添加了与Zhyf006同源性较高的Genbank 数据库中的黄单胞菌a－淀粉酶基因序列：AF482991、AY167892、AY167891、AY167890、AE012174、M85252、AY165038、AEOll710。 从基因同源性分析和基因进化树构建的结果来看，AY220755、AY216525和 Y220754，AY220756和 AY167891、AY167890、AF428991、AE012174、AY165038进化关系最近，AY247106和AY167S92、M85252进化关系较近，AY216526和 AE0ll710进化关系较近。