论文部分内容阅读
背景:肾细胞癌作为泌尿系统的常见肿瘤被广泛关注和研究,根据WHO对肾癌的分型及调查显示,肾透明细胞癌是肾癌中最常见的类型,其5年生存率低,在肾癌中的预后最差,随着二代测序技术和高通量基因检测技术的发展。基因调控肿瘤发生发展的机制得到越来越多的关注。本研究的目的为应用大数据分析预测对肾透明细胞癌预后及细胞特性产生影响的基因并利用实验证实其作用和机制,为临床肾透明细胞癌的诊断和治疗提供依据和参考。方法:应用在线数据库获取肾透明细胞癌患者的临床资料和表达数据,应用GSEA分析可能发挥作用的基因集,并筛选其中的基因。应用批量生存分析,多因素回归分析和差异表达分析手段逐步分析筛选出可能影响患者生存和预后的基因。由得到的基因通过在线网站预测其上游可能存在作用的调控基因并进一步预测上游调控基因可能的靶基因并通过实验验证分析其可能存在的作用及其作用方式。应用qRT-PCR检测长链非编码RNA LINC00942和miR-3139的表达情况及其互相调控可能存在的方式。应用细胞学研究实验验证长链非编码RNA LINC00942和miR-3139对肾透明细胞癌细胞的调控作用。应用蛋白免疫印迹实验验证肾透明细胞癌细胞中下游基因的变化情况。双荧光素酶报告实验验证长链非编码RNA与其下游靶基因之间的调控模式。最终应用动物实验,从体内层面验证LINC00942的作用。结果:mRNA IL-2、NCR-2,MYH7和KIR3DL2所构建的风险评估模型能有效的分析和预测肾透明细胞癌患者的预后状况。长链非编码RNA LINC00942在肾透明细胞癌细胞系和肾透明细胞癌组织中具有高表达。LINC00942能参与调控肾透明细胞癌细胞的增殖、迁移和侵袭转移特性。LINC00942能参与调控肾透明细胞癌细胞中下游的mRNA,进而调控肾癌细胞的细胞学特性。microRNA miR-3139能调控LINC00942的表达,其可作用于下游的mRNA GPM6A以及HIF介导的信号通路的调控作用。LINC00942是通过与miR-3139以直接结合的方式进行相互作用的。动物实验验证了在动物体内环境下LINC00942可以影响肾透明细胞癌细胞的致瘤性从而影响肿瘤的生长速度。结论:1.IL-2、NCR2、MYH7、KIR3DL2的过度表达与肾透明细胞癌患者的生存及预后状况显著相关。可作为肾透明细胞癌患者评估生存和预后状况的独立危险因素。2新的风险评估模型可用于预测肾透明细胞癌患者的生存和预后状况。3本研究的发现可能为肾透明细胞癌疾病早期诊断和治疗提供新的临床策略。4长链非编码RNA LINC00942可能以内源性竞争抑制的方式调控和影响肾透明细胞癌的发生进而影响肾透明细胞癌患者的生存及预后状况。5 LINC00942在肾透明细胞癌细胞和组织中均高表达。6 LINC00942能调控肾透明细胞癌增殖、迁移和侵袭转移的特性。7 LINC00942能以和miR-3139相互作用的方式调控肾透明细胞癌的细胞学特性。8 LINC00942的研究能为临床诊断和治疗肾透明细胞癌提供新的肿瘤标志物和治疗靶点。