【摘 要】
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背景:细胞免疫治疗是新兴的肿瘤治疗手段之一,其通过各种生物技术手段在体外对免疫活性细胞进行改造,扩增后再回输到患者体内,进而达到抑制或杀死肿瘤细胞的目的。由于恶性肿瘤的生物学特性和患者之间存在个体差异性,所以细胞免疫疗法在临床运用中并没有达到预期效果,这与当前侧重于免疫活性细胞的后期体外扩增,却忽视体内前期免疫激活有关。根据《黄帝内经》中“脏腑相生、卫出下焦和卫气根于肾”的理论,人体的免疫状态与肾
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背景:细胞免疫治疗是新兴的肿瘤治疗手段之一,其通过各种生物技术手段在体外对免疫活性细胞进行改造,扩增后再回输到患者体内,进而达到抑制或杀死肿瘤细胞的目的。由于恶性肿瘤的生物学特性和患者之间存在个体差异性,所以细胞免疫疗法在临床运用中并没有达到预期效果,这与当前侧重于免疫活性细胞的后期体外扩增,却忽视体内前期免疫激活有关。根据《黄帝内经》中“脏腑相生、卫出下焦和卫气根于肾”的理论,人体的免疫状态与肾阳具有明确的相关性。我们前期从温阳补肾以固卫气的立足点出发,在临床上发现了补肾回阳方具有临床抗癌良效,但其是否先通过体内前期激活免疫细胞潜能,然后增强机体免疫,进而提高抗肿瘤能力等过程有待探究。目的:本实验模拟肿瘤患者免疫抑制状态建立小鼠肾阳虚模型,研究中药补肾回阳方体内激活小鼠免疫功能后对其免疫细胞亚群的影响,证实补肾回阳方对免疫的增强功效。同时,分离小鼠外周血单核细胞进行后期细胞因子诱导培养树突状细胞（DC）,在细胞水平初步探究中药前期免疫激活对DC细胞扩增的增效作用,以求在细胞免疫治疗研究上取得突破。方法:将小鼠随机分成4组（补肾回阳组、模型对照组、补肾对照组和空白对照组）,模型组（补肾回阳组和模型对照组）每日腹腔注射25mg/kg氢化可的松,建立小鼠肾阳虚模型;对照组（补肾对照组和空白对照组）每日腹腔注射等量生理盐水,各组连续给药10d后,检测肾阳虚模型组和对照组小鼠的一般体征、外周血象、以及T淋巴细胞亚群等指标。随后补肾回阳组和补肾对照组给予补肾回阳方灌胃治疗,模型对照组和空白对照组用生理盐水灌胃,1次/d,连续给药15d。检测小鼠外周血的相关免疫细胞,通过流式细胞术测定各组小鼠的外周血、骨髓和脾脏的T淋巴细胞亚群水平;以及分离小鼠外周血单核细胞进行后期细胞因子诱导培养DC细胞,检测其体外扩增情况,最后进行数据统计分析。结果:1、造模结束后,模型组小鼠出现消瘦、毛发暗淡稀疏等现象,且小鼠体重增长明显减缓;其外周血中白细胞和淋巴细胞水平明显下降,同时T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+和CD8+的比例明显降低。2、中药灌胃治疗后,与模型对照组相比,补肾回阳组小鼠的体重增长明显,外周血中白细胞和淋巴细胞水平明显上升,补肾回阳组小鼠的外周血、脾脏和骨髓中T细胞、NK细胞和NKT细胞的比例都有明显提高。3、经过补肾回阳方灌胃治疗的肾阳虚模型小鼠,由外周血分离单核细胞经体外细胞因子诱导培养的DC细胞,细胞数量高于模型对照组。结论:1、氢化可的松腹腔注射法可以成功建立小鼠肾阳虚模型。2、补肾回阳方可以提升肾阳虚小鼠外周血中的白细胞和淋巴细胞数量,提高外周血、脾脏和骨髓中T淋巴细胞亚群的水平,证实了补肾回阳方具有增强免疫的功效。3、补肾回阳方能预先激活肾阳虚小鼠的免疫系统,从而使其后期经细胞因子体外诱导培养的树突状细胞（DC）数量明显增多。
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