不同区域晶状体上皮细胞功能基因组学比较

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目的:1.比较中央与周边区域的牛晶状体上皮细胞基因在转录水平上的差异。2.比较中央与周边区域的牛晶状体上皮细胞在蛋白质水平上的差异。3.从功能基因组学角度,比较中央及周边区域晶状体上皮细胞在转录与蛋白组成两个水平之间的差异。方法:1.正常牛眼10只,解剖显微镜下分离晶状体前囊膜,以游标卡尺测量并计算晶状体前囊膜的平均直径。2.正常牛眼30只,解剖显微镜下分离晶状体前囊膜,将附着于其上的上皮细胞分为中央(直径为10.5mm)和周边两部分。分别提取两个样本的总RNAs并经PCR扩增,以Cy3和Cy5分别标记扩增的中央与周边部分的eDNA,并与基因表达谱芯片杂交,经图象分析,生物信息学分析获得基因表达在转录水平差异的相关信息。3.正常牛眼32只,解剖显微镜下分离晶状体前囊膜,将附着于其上的上皮细胞分为中央(直径为10.5mm)和周边两部分。分别提取两个样本的蛋白,进行二维凝胶电泳和凝胶考马斯亮兰染色,通过对电泳图谱的分析选取一些有意义的蛋白质斑点,将其从凝胶上切下,进行凝胶内蛋白胰酶消化、点样、质谱分析,最后通过生物信息学途径分析鉴定蛋白。4.对上述结果数据进一步进行分析总结,比较不同区域细胞在基因转录水平或蛋白水平的差异,以及同一区域细胞在基因转录和蛋白组成两个水平之间的差异。结论:1.中央与周边区域牛晶体上皮细胞基因表达在转录水平上差异明显。2.中央与周边区域牛晶状体上皮细胞在蛋白质组成水平上差异明显。二维电泳结合质谱检测可良好显示不同区域晶状体上皮细胞蛋白表达差异。3.中央及周边区域晶状体的上皮细胞在转录水平与蛋白组成水平之间不完全一致,但功能分类上相似。
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