不同品系鸡akirin2和miR-155的克隆与表达特性分析

来源 :哈尔滨师范大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wlc198812
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肌肉发育和抗病性状相关基因的筛选和鉴定,对于鸡的品种改良和育种具有重要的理论参考和利用价值。NF-κB是调控免疫应答和肌肉分化过程的重要转录因子,AKIRIN2通过间接作用NF-κB复合物,正向调控包括IL-6在内的多种基因的转录,并且akirin2基因与牛的肌内脂肪含量和禽类肌纤维的发育存在相关性;而miR-155是一个NF-κB下游调控的非编码小RNA,不但参与调控髓系细胞的增殖、活化和T、B细胞的分化,而且miR-155可以通过靶向肌肉发育相关基因而调控成肌细胞的分化。本研究选择与肌肉发育和免疫相关的靶基因akirin2和miR-155,分析其在不同品系鸡中的序列信息和表达分布特性,以期为鸡的品系改良和分子育种相关候选基因的筛选提供理论参考。主要研究方法和实验结果如下:新城疫弱毒苗免疫雏鸡的实验结果表明:免疫后7天时,akirin2在肝中高表达,其余组织表达变化不明显;免疫后14天时,akirin2在法氏囊中高表达,在肝中表达下调。研究结果暗示akirin2不仅参与了天然免疫反应,而且对雏鸡的适应性免疫也具有重要作用。不同品系鸡akirin2序列比较与表达特性分析结果表明:在四个品系鸡akirin2编码区的5’端存在4个SNP位点,这4个碱基突变导致相应位点三个氨基酸残基的改变。结构预测分析并未发现AKIRIN2蛋白二级结构的差异,但有几处蛋白结合位点的位置和数量发生了细微的改变,推测对AKIRIN2蛋白的表达和活性可能产生一定的影响。同一品系不同日龄鸡的表达分析结果显示,akirin2在各组织中广泛表达,在法氏囊、脾、血液等免疫组织中表达均为较高水平,随着日龄的增长,akirin2在肌肉中的表达呈现出了降低的趋势。不同品系同一日龄鸡的表达分析结果显示,akirin2在肌肉、心脏、肌胃和胸腺中的表达均较低,在血液、大肠、腺胃和肝脏中的表达均较高,但是在两个品系鸡的脂肪和脾等组织表现出了表达水平上的差异。miR-155的序列分析以及组织表达谱结果表明:三个品系鸡pri-miR-155的序列长度一致、序列无碱基缺失和突变。成熟miR-155在脊椎动物各纲中高度保守,同源性高达100%,而pre-mi R-155的同源性低于成熟miR-155。miR-155在三个品系鸡的各组织中广泛表达,无组织特异性,但在免疫相关组织中表达较高,而在肌肉组织中表达较低。
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