【摘 要】
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斯钙素（stanniocalcin,STC）是一种糖蛋白激素,最早在硬骨鱼中发现,起着调节钙/磷平衡的作用。近年来发现STC2在肝癌、乳腺癌、卵巢癌等多种恶性肿瘤中具有重要意义。研究表明STC2在多种癌组织中相对于邻近正常组织过表达,其表达与组织学分级和肿瘤进展高度相关。STC2表达的调节可改变细胞增殖和上皮间质转化（EMT）。有研究发现血清STC2水平高的HCC患者的总生存率（OS）显著低于ST
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斯钙素（stanniocalcin,STC）是一种糖蛋白激素,最早在硬骨鱼中发现,起着调节钙/磷平衡的作用。近年来发现STC2在肝癌、乳腺癌、卵巢癌等多种恶性肿瘤中具有重要意义。研究表明STC2在多种癌组织中相对于邻近正常组织过表达,其表达与组织学分级和肿瘤进展高度相关。STC2表达的调节可改变细胞增殖和上皮间质转化（EMT）。有研究发现血清STC2水平高的HCC患者的总生存率（OS）显著低于STC2水平低的患者,这表明STC2是HCC诊断和预后的有潜力的标志物,在某些方面表现出优于AFP。本研究首先运用生物信息学对TCGA和NCBI GEO数据库中肝细胞癌患者肿瘤组织中STC2表达水平进行分析,发现与癌旁组织相比,肝细胞癌组织中STC2表达水平上调。利用protean软件对STC2蛋白抗原决定簇进行预测分析,得出STC2蛋白抗原决定簇的分布情况,并根据预测结果选择STC2蛋白201-302位氨基酸序列构建STC2-C重组蛋白,用于制备STC2单克隆抗体的研究。本研究运用原核表达技术将STC2蛋白201-302位氨基酸序列克隆到多个原核表达载体中,构建了重组表达质粒。通过优化诱导条件,获得可溶性的人重组蛋白STC2-C,将原核表达质粒转化表达的菌株扩增培养,在IPTG诱导下表达,经纯化得到人重组STC2-C蛋白。经牛凝血酶切除标签后,用获得的STC2-C蛋白免疫Balb/c小鼠获得多株分泌特异性抗体且效价高的杂交瘤细胞株,为后续构建人STC2蛋白双抗夹心ELISA检测方法及检测试剂盒的研发奠定了基础。结论:与癌旁组织相比,肝细胞癌患者肿瘤组织中STC2mRNA表达水平显著升高,STC2 mRNA高表达患者预后更差。本研究利用DNAstar软件Protein模块预测STC2蛋白抗原决定簇分布情况,根据预测结果构建了人重组STC2-C蛋白,初步成功获得多株分泌特异性抗体且效价高的杂交瘤细胞株。
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