大量资料表明,急、慢性排斥反应仍然是导致移植肾失功的主要原因。作为细胞免疫的发生基础,抗原递呈是排斥反应的重要前提之一。树突状细胞（dendritic cell,DC）是目前公认的功能最为强大的抗原递呈细胞（antigenpresenting cell,APC）,在免疫始动环节中发挥着重要的作用。近年来的研究发现,DC不仅可引发排斥,还可诱导T、B淋巴细胞发生移植物特异性的免疫耐受,而后者被公认为排斥反应的最终解决方案。随着DC在移植免疫的研究中逐渐升温,对移植后机体DC变化规律的研究越来越多,本研究旨在通过免疫组化染色的手段,观察大鼠肾移植后早期移植肾及肾门淋巴结内DC的变化规律,并藉此进一步探讨排斥反应的防治,共分三个部分,分述如下:第一章大鼠异体双侧肾移植动物模型的建立目的:建立一种大鼠异体异位双侧肾移植的动物模型。方法:SD大鼠为供体,Wistar大鼠为受体,共30对。采用3%戊巴比妥钠按30mg/kg行腹腔注射麻醉,辅以乙醚吸入麻醉。供体手术方法为:取腹部大十字切口入腹,首先游离肠系膜动脉及腹腔干动脉,分别结扎、切断,显露肝下下腔静脉及右肾动脉水平以上的腹主动脉。结扎、切断直肠,将所有胃肠道组织向上方牵出腹腔,彻底同时显露双肾。游离双侧肾脏及输尿管、膀胱。在髂腰静脉上方游离腹主动脉及下腔静脉并结扎,继续向上游离出一段长1cm左右的腹主动脉,插入并固定好灌注管。阻断供肾上方的下腔静脉及腹主动脉,剪开下腔静脉建立流出道,以4℃Euro-Collins灌注直至双肾呈土黄色。整块切取双肾、双侧输尿管、膀胱、腹主动脉、下腔静脉。修肾方法为:从背侧剪开包绕腹主动脉的结缔组织,找到两支腹主动脉发出的第二腰动脉分支残端,并结扎。保留包括双肾动静脉开口在内的腹主动脉和下腔静脉,长约1-1.5cm。修整腹主动脉及下腔静脉上下开口。以双侧输尿管膀胱内口为中心,修整出椭圆形膀胱瓣以备吻合。受体手术方法为:术前1小时,受体按400U/kg行腹腔注射肝素盐水以实现全身肝素化。取“+”形手术切口,横切口指向术者。入腹后,在髂腰静脉上方游离出一段长1.5cm左右的腹主动脉及下腔静脉,以四支血管夹分别阻断腹主动脉、下腔静脉上下端血流,于上下血管夹之间切除1cm左右的腹主动脉及下腔静脉,修整好上下断口。将供者腹主动脉同受体腹主动脉的上下断口行两定点端端连续吻合,每个吻合口缝合约18针;同法吻合静脉,每个吻合口约22针。开放血流,见腹主动脉立即恢复搏动,双侧供肾变为鲜红色。剪去膀胱顶,将供体椭圆形膀胱瓣与受体膀胱作两定点全层间断吻合。结果:整个移植过程＜180min,热缺血时间＜5s,冷缺血时间＜90min,血管吻合时间＜50min。30例手术中,24例成功,手术成功率80%。失败的原因主要有:麻醉、大出血、开放后双肾灌注不良、后肢深静脉血栓形成。术后在未服用任何免疫抑制剂的情况下,手术成功大鼠术后存活时间均超过一周。结论:大鼠双侧肾移植模型是一种可行性好,成功率高的肾移植动物模型。与单侧模型相比,具有增加取材次数、获取配对资料、提高工作效率的优点,在技术上减少了血管吻合的难度,降低了动脉痉挛及狭窄的发生率,值得推广。第二章大鼠移植肾内树突状细胞的早期观察目的:观察大鼠肾移植后早期移植肾内DC的变化规律,藉此探讨排斥反应的防治。方法:受体Wistar大鼠30只,按5只/组随机分为6组,35只SD大鼠作为供体,其中5只供肾作为对照组,不行受体手术。30只Wistar大鼠行同种异体原位肾移植术,并分别于开放供肾循环后1,6,12,24,48,72h切取移植肾,行石蜡包埋切片,抗S-100蛋白免疫组化染色和HE染色。观察移植肾病理学改变及肾小球内DC数量变化,以单个肾小球内DC个数对移植肾内DC数量计值。结果:各组切片均未见肾小管肾炎、动脉内膜炎等急性排斥反应（acutereiection,AR）表现。在抗S-100蛋白免疫组化切片中,肾小球内DC呈棕黄色染色,肾小管上皮细胞呈淡黄色,为阳性对照。对照组DC数量为:0.50±0.07,术后1h组为:1.06±0.18,6h组为:2.60±0.31,12h组为:3.76±0.11,24h组为:6.54±0.40,48h组为:3.92±0.11,72h组为:2.60±0.26。可以看出:对照组及术后1h组肾小球内DC数量基本为零;此后逐渐增加;24h组达到顶峰,随后DC数量缓慢下降。各组间均数两两比较结果,对照组vs.1h组无显著性差异（P＞0.05）,但两者与其他组比较差异显著(P_max=0.042)。24h与其他各组相比差异均显著(P_max=0.038)。结论:大鼠肾移植术后72 h内,供肾肾小球DC数量呈单峰曲线变化;受体DC不断迁入供肾是DC数量增加的主要原因;揭示移植肾内DC变化规律有助于进一步完善免疫抑制剂及抗炎药物的使用方案。第三章大鼠移植肾周淋巴结内树突状细胞的早期观察目的:找寻大鼠左侧肾门淋巴结具体位置;观察大鼠肾移植后早期移植肾周淋巴结内DC的变化,进一步明确肾移植术后早期DC二次迁移的规律。方法:Wistar和SD大鼠各5只,麻醉开腹后,以1ml注射器将25%美兰0.2ml沿左肾外侧缘注射到左肾窝内的脂肪里,6小时后观察肾周淋巴结染色情况。Wistar大鼠60只随机均分为两组,以SD大鼠作为供体,30只Wistar大鼠行异体原位左侧肾移植术,按每小组5只大鼠分别于开放移植。肾血流后1h,6h,12h,24h,48h,72h切取移植肾周淋巴结;另30只Wistar大鼠复制左肾缺血再灌注动物模型,仅阻断左肾动静脉血流45min,不切除左肾,按每小组5只大鼠分别于开放左肾血流后1h,6h,12h,24h,48h,72h切耿左肾门淋巴结。所有标本行石蜡包埋切片,抗S-100蛋白免疫组化染色。观察并比较两组Wistar大鼠肾门淋巴结皮质区DC数量及形态变化。结果:将美兰注射到左肾周脂肪后6小时后,所有10只实验大鼠左肾门淋巴结均出现美兰染色,证实该淋巴结负责收集肾门区域的淋巴。肾移植和缺血再灌注两种手术方式间的差异显著（P＜0.01）。从数量上看,对照1h组肾门淋巴结皮质区内DC数量最少,6h组略有增多,48h达到最大值,随后下降。肾移植1h组肾门淋巴结皮质区内DC数量最少,6h～48h开始缓慢增多,至72h达到最大值,呈一条上升的曲线,各组均数差异多重比较显示:仅1h vs.6h组间均数比较没有统计学意义（P=0.153）;其他各组间比较差异均显著（24h vs.48h:P=0.011,其余均P＜0.01）。从形态上看,1h、6h肾移植组DC形态和对照组类似,呈散在分布,椭圆形,表面少见突起,为未成熟DC（immature dendritic cell,imDC）形态。随时间的发展,12h～72h组淋巴结皮质区内DC逐渐呈区域性密集分布,DC形态也发生明显变化,光镜下可见DC伸出大量树突样突起,环抱淋巴细胞,为成熟DC（mature dendritic cell,mDC）形态,这种特征随时间的增加而越发明显。结论:明确大鼠RDLN的具体位置有助于使其成为人们研究移植免疫机制的窗口。肾移植后DC存在二次迁移（外周血到移植肾,移植肾到RDLN）的可能性极大,DC能否成熟并发挥其功能同其在机体内迁移的过程密切相关。影响DC迁移的药物对DC的成熟过程及抗原递呈均将产生影响,其研究前景广阔。