【摘 要】
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荧光蛋白（fluorescent proteins,FP）是生物学研究中的一项非常重要的工具。同时,他们逐渐运用到微藻的研究中,例如莱茵衣藻（Chlamydomonas reinhardtii）。几种荧光蛋白,例如mCherry,tdTomato,Venus或者CrYFP,CrGFP,mTagBFP和PtCrCFP都成功地作为报告基因用到了莱茵衣藻诱变株UVM4和UVM11的核基因组转化中。但是,
【基金项目】
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国家杰出青年科学基金（批准号:BK2014033）； 国家自然科学基金（批准号:21375062、21575065）； 国家全球专家招募计划（中国“千名青年人才计划”）；
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荧光蛋白（fluorescent proteins,FP）是生物学研究中的一项非常重要的工具。同时,他们逐渐运用到微藻的研究中,例如莱茵衣藻（Chlamydomonas reinhardtii）。几种荧光蛋白,例如mCherry,tdTomato,Venus或者CrYFP,CrGFP,mTagBFP和PtCrCFP都成功地作为报告基因用到了莱茵衣藻诱变株UVM4和UVM11的核基因组转化中。但是,目前仍然很难在野生型藻株中将FP作为报告基因来使用,原因是尽管我们可以将外源基因高效地转化并整合到莱茵衣藻核基因组中,但是外源基因的表达效率却非常低。因此本文的目的是研发一种可以在莱茵衣藻中稳定高效表达的荧光蛋白变体。这个变体是同时基于Venus和超折叠GFP（superfolder GFP）构建的,我们将它命名为sfVenus（superfolder Venus yellow fluorescent protein,超折叠维纳斯黄色荧光蛋白）。实验表明,报告基因sfVenus在莱茵衣藻细胞中的表达更高效,最高表达量约为Venus的1.5倍。另外,本实验还探究了两个以及三个串联sfVenuses在莱茵衣藻中的表达情况,实验证明,它们在莱茵衣藻中的表达仍然具有一定的难度,尤其是,2sfVenuses基因只能表达出一个sfVenus,而且荧光强度并不如基因sfVenus表达的蛋白。
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