体外培养非听觉细胞对音乐的应答及可能的机制

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背景与目的音乐治疗这门学科从上世纪四十年代成立至今建立和发展出了众多实践和理论的流派,从心理、生理和行为等不同角度探索音乐治疗的机制,积累了大量的研究成果。一方面证明了音乐治疗的有效性,另一方面从不同角度解释了音乐治疗可能的原理。此外,音乐治疗在临床上也有很好的表现,音乐能改善中风患者的运动和认知记忆、感觉处理、视觉注意力等能力;音乐有降压功效,且不同频率的音乐效果有明显区别;音乐能帮助AD患者增强记忆力;音乐还可以在手术和治疗过程中帮助患者缓解疼痛,减轻焦虑;音乐能改善PD患者的步态和认知状态;音乐治疗在临终关怀中被广泛应用。而过去大多数研究是建立在整体动物的基础上,以听觉系统完整的前提去探索和思考音乐治疗的原理,这在一定程度上是因为许多研究者倾向于将音乐治疗归属于心理治疗的范畴,认为其治疗效果是建立在音乐通过引起心理和情绪的波动和共鸣进而改变生理状态的基础上。不否认音乐的心理干预效果带来的影响,值得深思的是音乐治疗是否必须建立在心理效应的基础上,音乐能否直接诱发生理变化,离开完整系统除了有听觉功能的毛细胞外的非听觉细胞能否对音乐产生应答,有何应答,其机制又是什么,解开这些谜题将有利于更好的指导和发展音乐治疗这一安全经济的治疗手段。本实验通过音乐对体外培养的非听觉细胞的干预效应的研究来探讨音乐治疗在细胞水平上的可能机制。1、通过研究多种体外培养的非听觉细胞对音乐干预的应答效应,将音乐治疗的研究落实到细胞和分子水平,为音乐治疗处方提供更精准可靠的理论依据和科学指导。2、除了考虑音乐治疗的处方,剂量及是否有副作用也是我们需要思考的问题。3、研究音乐治疗过程中声波物理刺激的直接效应和价值,为寻找经济安全的治疗手段提供新的思路和线索。方法体外培养新生24h SD大鼠原代大脑皮层星形胶质细胞并经细胞免疫荧光染色法鉴定星形胶质细胞;N-2A细胞系(Neuro-2a,小鼠来源神经瘤母细胞)和HUVEC细胞株(人脐静脉内皮细胞)的培养;大鼠脾淋巴细胞的分离培养;倒置显微镜观察各个位置细胞岛的分布和大小;用MTT法检测不同细胞的生存活性及星形胶质细胞生长趋势;透射电镜观察星形胶质细胞超微结构差异;免疫印迹法测PAD2和GFAP蛋白的表达量的变化,并检测音乐干预后星形胶质细胞能否表达神经干细胞标志物-巢蛋白。结果1、新生24小时大鼠大脑皮质星形胶质细胞为GFAP阳性细胞。2、倒置显微镜下观察结果表明音乐能促进星形胶质细胞的增殖分裂,同样也促进淋巴细胞克隆岛的形成。3、MTT法检测发现音乐干预后不同细胞生存活性明显提高,且这一效果会随着时间的迁移而有所变化。4、对细胞的体外生长曲线的测定发现音乐能有效的促进星形胶质细胞的生长,且提高了细胞对谷氨酸-甘氨酸兴奋毒的耐受力。5、透射电镜观察星形胶质细胞的超微结构,发现音乐组的细胞的突起丰富,线粒体数量增多。6、免疫印迹实验发现星形胶质细胞可以表达神经干细胞标志物-巢蛋白,且外界干预会改变巢蛋白的表达量,此外音乐干预后星形胶质细胞PAD2和GFAP蛋白表达下调。结论1、对音乐的感知与反应不需要完整的系统,体外培养的不同非听觉细胞均能对音乐产生应答反应。2、音乐能促进细胞增殖分裂和生长。3、音乐能提高细胞兴奋毒的耐受力。4、音乐能提高细胞生存活性,音乐干预后细胞线粒体数量明显增加,细胞的突触更加丰富。5、音乐干预能下调星形胶质细胞PAD2和GFAP的表达量。
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