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目的:冠状动脉旁路移植术(coronary artery bypass graft,CABG)作为一种稳定而有效的血管重建方法[1]被广泛地应用于治疗冠状动脉粥样硬化性心脏病,但其远期疗效不甚理想。血管内膜增生是导致血管重建术后自体静脉桥管腔狭窄或闭塞的主要原因,已被大量的研究所证实。引起静脉移植再狭窄的主要原因是血管内皮损伤,其主要是由于血管内膜增生,血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle,VSMCs)过度增殖及分泌大量细胞外基质。即再狭窄是一种由于手术的物理性损伤导致的缺血再灌注损伤后的局部血管修复反应,是血管重塑的过程。因此,阻断血管平滑肌的过度增殖是预防CABG术后静脉桥再狭窄的有效策略。大量的研究证实,阿托伐他汀能够抑制血管平滑肌的增殖,据此推测,阿托伐汀可能阻断CABG术后发生静脉桥再狭窄,但其发生机制至今尚未阐明。NF-κB是从B淋巴细胞核中检测到的一种能与免疫球蛋к轻链基因的增强子κB序列特异结合的核蛋白因子。非活化状态下NF-κB以与IκB聚合的三聚体形式或与前体蛋白聚合的二聚体形式存在于胞浆中,在多种细胞因子的作用下,通过多种信号途径IκB发生磷酸化并与NF-κB解聚,NF-κB被激活,将信息由胞浆传递至胞核并启动相关靶基因的转录,参与自由基损伤、细胞凋亡、免疫调节、炎症反应等病理生理过程[2]。此外,还有一些研究发现,当血管内皮细胞损伤发生时,多种炎症介质和细胞因子释放,激活NF-κB,NF-κB二聚体被活化,NF-κB激活后上调平滑肌细胞及内皮细胞等基因表达,引起血管内膜增生而诱导管腔狭窄。但CABG术后静脉桥血管内皮细胞增殖是否通过NF-κB信号转导途径诱导再狭窄,尚有待阐明。为此,本实验旨在观察CABG术后静脉桥血管内皮细胞增殖是否通过NF-κB信号转导通路诱导再狭窄,探讨阿托伐他汀是否通过NF-κB信号通路发挥对静脉桥的保护作用。方法:健康雄性新西兰大白兔(3±0.5Kg)40只,建立自体静脉移植动物模型。1阿托伐他汀钙对静脉桥血管壁内膜厚度、平滑肌细胞数及超微结构的影响。具体分组如下:①假手术组(sham)组(n=10):仅分离左侧颈外静脉,不行血管移植,假手术1d起,经胃管灌注生理盐水;②移植对照组(control)组(n=10):静脉移植术后1d起,经胃管灌注生理盐水;③阿托伐他汀钙(atorvastatin)5mg组(n=10):静脉移植术后1d起,经胃管灌注阿托伐他汀,剂量为5mg/kg.d;④阿托伐他汀钙(atorvastatin)10mg组(n=10):静脉移植术后1d起,经胃管灌注阿托伐他汀,剂量为10mg/kg.d。每组共处理4w,在静脉移植后或假手术后4w取静脉桥,分别用HE染色法、免疫组化、电镜观察阿托伐他汀对静脉桥血管壁内膜厚度、平滑肌细胞数及超微结构的影响。2阿托伐他汀钙对NF-κB蛋白及NF-κB p50/p65二聚体复合物表达的影响。具体分组如下:①假手术组(sham)组(n=10):仅分离左侧颈外静脉,不行血管移植,假手术1d起,经胃管灌注生理盐水;②移植对照组(control)组(n=10):静脉移植术后1d起,经胃管灌注生理盐水;③阿托伐他汀钙(atorvastatin)5mg组(n=10):静脉移植术后1d起,经胃管灌注阿托伐他汀,剂量为5mg/kg.d;④阿托伐他汀钙(atorvastatin)10mg组(n=10):静脉移植术后1d起,经胃管灌注阿托伐他汀,剂量为10mg/kg.d。每组共处理4w,在静脉移植术后或假手术后4w取静脉桥,应用Western blot方法观察NF-κB蛋白表达的变化,免疫共沉淀(Co-immunoprecipitation)方法观察NF-κB p50/p65二聚体复合物表达的变化。探讨阿托伐他汀对NF-κB表达的影响。结果:1阿托伐他汀钙对静脉桥血管壁内膜厚度的影响采用HE染色方法,在光镜下观察静脉桥移植术后,静脉桥血管壁内膜厚度的变化。Control组(Fig.2)、atoravastatin 5mg组(Fig.3)、atoravastatin 10mg组(Fig.4)静脉桥血管管壁与sham组(Fig.1)相比,均有不同程度的增厚(P<0.05)。与Sham组(Fig.1)相比,Control组(Fig.2)静脉桥血管壁明显增厚(P<0.01)。与Control组(Fig.2)相比,atoravastatin 5 mg组(Fig.3)无显著性差异(P>0.05);atoravastatin 10 mg组(Fig.4)静脉桥血管管壁平滑,内膜增生程度明显减少(P<0.05)。2阿托伐他汀钙对静脉桥血管壁内膜平滑肌数目的影响采用免疫组化方法,在光镜下观察静脉桥移植术后,静脉桥血管壁内膜平滑肌细胞数目的变化。Control组(Fig.6)、atoravastatin 5 mg组(Fig.7)、atoravastatin 10 mg组(Fig.8)静脉桥血管内皮及平滑肌层与sham组(Fig.5)相比,均有不同程度的增殖(P<0.05)。与Sham组(Fig.5)相比,Control组(Fig.6)有大量增殖细胞深染(P<0.01);atoravastatin 5 mg组(Fig.7)深染的增殖细胞虽较Control组有所减少,但无明显变化(P>0.05);atoravastatin 10 mg组(Fig.8)深染的增殖细胞明显减少(P<0.05)。3阿托伐他汀钙对静脉桥血管壁超微结构的影响在电镜下观察静脉桥移植术后,静脉桥血管壁超微结构的变化。Control组(Fig.9)可见静脉桥血管壁内膜明显增厚。与Control组(Fig.9)相比,atoravastatin 5 mg组(Fig.10),静脉桥血管壁内膜有一定程度的增厚,虽较Control组(Fig.9)少,但无显著差异(P>0.05);atoravastatin 10 mg组(Fig.11)内膜连续性好(P<0.05)。4阿托伐他汀钙对NF-κB蛋白表达的影响应用Western blot方法观察静脉桥移植术后,阿托伐他汀钙对NF-κB蛋白表达的影响NF-κB p50(Fig.12)在Sham组、control组、atoravastatin 5 mg组、atoravastatin 10 mg均有一定的表达量。Sham表达量较少。与Sham组相比,control组、atoravastatin 5 mg组、atoravastatin 10 mg组其蛋白表达均有所上调(P<0.05)。与control组相比,atoravastatin 5 mg组其蛋白表达虽有所下调,但无显著性差异(P>0.05),atoravastatin 10 mg组此蛋白表达明显下调(P<0.05)。上述结果表明,阿托伐他汀钙能够显著下调NF-κB p50的表达。5阿托伐他汀钙对NF-κB p50/p65二聚体复合物表达的影响通过免疫共沉淀(Co-immunoprecipitation)的方法研究了静脉桥移植术后,阿托伐他汀钙对NF-κB p50/p65二聚体复合物表达的影响。NF-κB p50/p65二聚体复合物(Fig.12)在Sham组、control组、atoravastatin 5 mg组、atoravastatin 10 mg组均有表达,其中control组此二聚体复合物表达最多。与Sham组相比,control组其表达显著上调(P<0.01);atoravastatin 5 mg组此二聚体复合物表达虽有所下调,但明显高于Sham组(P<0.05)。与control组相比,atoravastatin 10 mg组其表达明显下调,差异有显著性(P<0.01)。上述结果表明,阿托伐他汀钙能够有效阻断静脉桥移植术后NF-κB p50/p65二聚体复合物数量的上调。小结:1静脉桥移植术后,NF-κB的蛋白表达显著上调;NF-κB被激活,即表现为NF-κB发生二聚体化,NF-κB二聚体复合物明显上调,并由胞浆转移至胞核。2静脉桥移植术后,经10 mg atoravastatin处理,下调NF-κB p50蛋白的表达,下调NF-κB p50/p65的表达二聚体复合物的表达。结论:静脉桥移植术后,静脉桥血管内皮细胞增殖通过NF-κB信号通路诱导再狭窄;阿托伐他汀钙通过NF-κB信号通路发挥对静脉桥的保护作用。