木聚糖酶能够降解木聚糖形成木寡糖或木糖,在造纸、饲料、食品、能源以及工农业等有着广泛的应用前景。本实验室选用的亲本菌株黑曲霉A-25所分泌的B-1,4-内切木聚糖酶XynⅢ其最适温度为46℃、最适pH为3.8,对于在高温高碱的极端生物工程环境下使用非常不利。前期成功获得成熟的XynⅢ-CBD、XynⅢ-CBD1和XynⅢ-CBD2,其中XynⅢ-CBD的最适温度提高了2℃,XynⅢ-CBD1的pH提高了0.4个单位XynⅢ-CBD2在54℃保温30min后相对酶活提高了近一倍。然而这些都是将结构域融合在木聚糖酶的C端的研究。本研究通过融合PCR技术,将来源于极端嗜热菌海栖热袍菌XynA的纤维素结合结构域CBD1和CBD2基因通过融合PCR分别融合到木聚糖酶XynⅢ基因的N端,连接在克隆载体pMD18-T并转化Jm109,挑选阳性转化子提取质粒酶切连接pET20b表达载体,并在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达,最后对重组酶的粗酶进行了酶学性质分析。本课题成功获得重组蛋白CBD,-XynⅢ和连接了片段CBD2的Linker-XynⅢ,其中CBD1-XynⅢ相比野生型最适pH提高了0.2个单位,并且在2.6到4.4之间活性保持在60%以上,说明CBD1-XynⅢ比Linker-XynⅢ和XynⅢ更适合在酸性环境下保存；Linker-XynⅢ相比野生型半灭活时间降低了9min, CBD1-XynⅢ降低的更多。尽管只是连接了片段的CBD2,却在一定程度上抵消了引入外源蛋白对于野生型蛋白稳定性的负面影响。见微知著,可推断CBD1对于提高酶的pH活性起着至关重要的作用,而CBD2对于酶的温度稳定性发挥着关键的作用。