目的:再生障碍性贫血（再障）是血液系统造血功能障碍性疾病,导致全血细胞减少。目前常使用雄激素和免疫抑制剂治疗,但疗效不够理想,并可导致严重的副作用。本实验室自行研制的人参二醇组皂苷（PDS）,具有促进造血和调节免疫的双重功效,可用于治疗免疫性血小板减少症（ITP）和原因不明的白细胞减少症。但PDS对再障的疗效及其作用相关蛋白尚不明确,本文观察PDS促进再障患者骨髓红系（CFU-E）、粒系（CFU-GM）造血祖细胞增殖的作用,探索PDS诱导再障骨髓细胞造血相关蛋白表达的差异性,并与阳性对照药物雄激素相比较,探索其治疗再障的作用机制,为今后扩大PDS的功能主治及部分代替雄激素而提供实验依据。方法:1.采用正常的人骨髓半固体红系、粒系造血祖细胞培养,分别加入不同浓度 PDS0、5、10、20、50、100和 150mg/L,阳性对照药睾酮为 0、10-8、10-7、10-6和10-5M,以筛选药物促进人骨髓CFU-E、CFU-GM增殖的恰当剂量。2.应用琼脂半固体CFU-E、CFU-GM集落生成试验,培养21例慢性再障患者的骨髓标本。分别加入恰当剂量PDS40mg/L与阳性对照药睾酮10-7M,以不加药的为对照。孵育7d计数集落;并计算PDS促进CFU-E、CFU-GM增殖的提高率。3.Balb/c小鼠经5Gy钴60照射后,尾静脉注射DBA/2小鼠5×106淋巴细胞,制备免疫介导型再障模型。实验分4组,正常对照、再障模型、PDS80mg/kg/d治疗和阳性药物十一酸睾酮26.7mg/kg/d组。灌胃治疗17d,检测外周血象。4.取各组小鼠股骨和胫骨的骨髓有核细胞,分别提取总蛋白,经等电聚焦（IEF）和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,硝酸银染色,扫描比较各组间差异蛋白质图谱,经DeCyder Image QuantTM V6.5软件分析,选择PDS治疗与模型组相比差异2倍以上的蛋白点,割胶和酶解后,质谱分析鉴定。结果:1.PDS对正常的人骨髓红系、粒系造血祖细胞均有显著的促进增殖作用,呈剂量依赖性。20、50mg/L对CFU-E的集落提高率分别为43.8±0.5%、43.8±1.0%;CFU-GM的集落提高率分别为43.1±5.0%、41.4±5.7%。睾酮对CFU-E也有显著的促进增殖作用,10-7 M时CFU-E的集落提高率为44.2±0.6%;而睾酮对CFU-GM集落无直接的刺激增殖效应。2.慢性再障患者21例,其中16例患者的骨髓培养生成CFU-GM,CFU-E集落数,分别为57.7±21.3,64.1±17.5/2×105细胞,40mg/LPDS显著地提高集落数为80.8±26.3,92.7±25.3/2×105细胞,明显高于对照组（p均<0.01）,集落提高率为 42.3±21.2%,45.0±12.9%。10-7M 睾酮组 CFU-E 集落数为 90.6±25.1/2×105细胞,显著高于对照组（P<0.01）,而对CFU-GM无直接的作用。其余5例再障患者骨髓培养集落生成很少,与疾病严重程度相关。3.再障小鼠模型活动能力和食欲均减退、毛色无光泽;外周血红细胞、白细胞、血小板计数和血红蛋白均显著降低。PDS治疗组的一般情况有明显改善,白细胞、血小板计数分别为0.83±0.16,524.71±58.23（109/L）,均明显高于模型组的0.50±0.12,411.40±54.84（109/L）（p均<0.01）。红细胞计数也有一定程度的恢复（P<0.05）,阳性对照睾酮也显示其疗效明显。4.再障小鼠骨髓有核细胞的蛋白质研究,PDS治疗组表达上调2倍以上的蛋白4个,包括丝/苏氨酸蛋白激酶、F-box蛋白,微管调节蛋白stathmin、甲基化转移酶结构域蛋白;下调2倍以上的蛋白9个,包括真核释放因子、LdlBp、砷甲基转移酶、微管蛋白、嗜中性粒细胞颗粒、膜联蛋白A1、细胞骨架肌动蛋白、TRIM蛋白、线粒体转录启动因子。这些差异蛋白的功能均与血细胞生成相关。结论:1.PDS体外能够有效地促进再障患者骨髓红系、粒系造血祖细胞增殖,而雄激素仅能促进CFU-E增殖,对CFU-GM没有直接的作用,提示PDS促进骨髓粒系造血祖细胞增殖的作用优于雄激素。2.PDS体内有效地改善再障小鼠的一般情况,提高外周血白细胞和血小板,预期治疗再障可作为现有药物的有力补充,而无明显副反应。3.PDS具有促进再障造血祖细胞增殖,加快造血功能恢复的功效.骨髓差异蛋白分析提示其作用机制涉及到造血信号传递途径蛋白,骨髓基质蛋白,甲基化与磷酸化相关蛋白等。