论文部分内容阅读
目的：研究过氧化物酶体增值体激活受体(PPAR)γ激动剂罗格列酮(Rosiglitazone，RGZ)抑制转化生长因子β1(TGF-β1)诱导人近端肾小管上皮细胞(HKC)转分化的作用，探讨罗格列酮治疗肾脏病的机理。方法：以HKC细胞为研究对象，采用免疫印迹检测纤维连接蛋白(FN)表达的水平以评价细胞外基质合成的变化，以α-SMA为HKC激活的标志物。采用免疫荧光对FN的表达进行定位，以明胶酶谱分析法(gelatin zymography)检测细胞上清中基质金属蛋白酶(MMP)表达量的变化。结果：实验结果表明TGF-β1具有促进HKC细胞表达α-SMA的作用，并可以促进FN合成，罗格列酮能够抑制TGF-β1所诱导的HKC细胞α-SMA和FN合成，此作用呈明显的剂量依赖性，和人工合成PPARγ特异性激动剂GW1929作用相似。并且罗格列酮单独作用于HKC时，也有降低HKC细胞FN合成的作用。TGF-β1有促进HKC培养上清夜中MMP-2表达的作用，此作用呈明显的时效依赖性，不能为罗格列酮所阻滞。结论：罗格列酮能够阻止TGF-β1诱导的人近端小管上皮细胞细胞转分化与细胞外基质的表达与合成，和人工合成PPARγ特异性激动剂GW1929作用相似。目的：通过观察罗格列酮抑制单侧榆尿管结扎(UUO)小鼠病变肾组织纤维化的作用，探讨罗格列酮治疗肾脏病的作用机制。方法：采用左侧输尿管结扎的方法建立单侧输尿管梗阻(UUO)雄性CD-1小鼠动物模型，术后小鼠随机分为3组：Sham，UUO，UUO+罗格列酮(7.2mg／kg／d)治疗组。实验设两个时间点：3天，6天。以α—平滑肌肌动蛋白(α-SMA)做为上皮细胞转分化的观察指标。以纤维连接蛋白(FN)为间质纤维化的指标，以蛋白印迹技术(Western blotting)检测α-SMA、FN的表达，以免疫荧光及苏木素-伊红(HE)染色检测组织中纤维化指标的表达及观察肾组织病变程度。结果：单侧输尿管结扎可以使小鼠肾组织产生间质纤维化，并且梗阻肾FN和α-SMA的表达增加，呈明显的时效性，罗格列酮可以减轻UUO小鼠肾脏间质病变，降低FN和α-SMA的表达水平，抑制上皮细胞转分化。结论：罗格列酮可以改善UUO小鼠肾脏的纤维化，其作用可能与减少间质纤维连接蛋白的表达和抑制上皮细胞转分化有关。目的：观察高糖诱导肾小管上皮细胞表达纤维连接蛋白(FN)与整合素联接激酶(ILK)的关系，探讨糖尿病肾病小管间质纤维化的发病机制。方法：以人肾小管上皮细胞株HKC细胞和链脲佐菌素(STZ)诱导的CD-1小鼠糖尿病动物模型为研究对象，采用蛋白印迹的方法检测细胞或肾组织ILK和FN蛋白的表达。通过基因转染的方法，将含无激酶活力的人ILK基因表达质粒pCMV-kdILK转染HKC细胞，观察抑制ILK活力对高糖诱导的HKC合成FN的影响。结果：动物实验结果表明，STZ注射4周CD-1小鼠血糖水平显著高于对照组(20.3±2.7vs 6.1±1.4 mmol／L)，同时，肾组织ILK和FN的表达量亦显著高于对照组，分析结果表明二者之间存在明显的相关性(P＜0.01)。细胞培养研究证实，高糖能够刺激HKC上调ILK和FN蛋白的表达，并且呈时间和剂量依赖性。HKC细胞转染pCMV-kdILK质粒以抑制ILK的活力，能够显著地拮抗高糖刺激HKC表达FN的作用。结论：高糖能够通过上调ILK蛋白造成肾小管表达并合成FN，抑制ILK能够拮抗高糖刺激HKC合成FN的作用。说明ILK介导高糖诱导肾小管上皮细胞增加FN蛋白的合成。