分选酶A是分选酶家族的重要成员之一,属于一种膜结合的巯基转肽酶,广泛存在于革兰氏阳性菌中,是将细菌表面蛋白锚定到细胞壁上的关键酶。本研究利用分选酶A的催化作用机制,将其作为检测元件制备了两种电化学酶生物传感器,对金黄色葡萄球菌进行检测研究。本研究首先制备了CMK-3和MHCS两种介孔碳材料,用湿氧化法分别进行羧基功能化改性,利用羧基与氨基的反应,将其作为载体分别对分选酶A进行固定化研究。运用SEM、TEM和XRD对两种材料的表观形貌及晶体结构进行观测,N2吸附-脱附实验表明两种材料均属于介孔范围,且比表面积较大,有利于实现酶的固定化。通过傅里叶红外光谱官能团表征分析证明对两种材料羧基功能化改性成功,对固定化前后的分选酶A进行红外光谱拟合分析,发现固定化之后分选酶A分子内β-折叠含量保留70%以上,可初步确保酶活。采用拉曼、XPS等手段证明载体材料与分选酶A成功结合。在固定化过程中探究了实验最优条件,在此条件下,利用酶标仪检测出固定量为分别为85±3.1 mg/g和91±3.2mg/g,固定后酶活基本保持为原来的85%以上。将两种固定化分选酶A材料分别与石墨、石蜡研磨成粉末,制成碳糊电极,利用电化学三电极检测系统对电极性质进行表征,改变金黄色葡萄球菌菌液浓度检测电信号变化,发现O-CMK-3-M电化学传感器在0.125×102~3×102 CFU/m L浓度范围内呈现较好的线性关系(r=0.9852),O-MCHS-M电化学传感器在0.125×102~2.5×102 CFU/m L呈现较好的线性关系(r=0.9867),检测限为分别为10 CFU/m L和9 CFU/m L。