研究背景退热止痛散为名老中医臧堃堂教授的经验方,经多年临床验证,其对于外感风寒所致上呼吸道感染的发热、头痛等症,具有显著疗效。但由于该方以散剂的形式应用于临床,病人服用剂量大,口感不佳,服用与携带极为不便,同时从卫生学角度来看也不合规范。因此考虑以药效为追踪指标采用现代的提取分离技术,提取分离其有药部位,以进行二次开发。退热止痛散主要由柴胡、羌活、菌陈、桂枝药材组成,在前期提取分离工作中运用了超临界C02萃取和分子蒸馏联用技术,以经典的解热镇痛药效为追踪指标,采用正交试验方法,筛选出其解热镇痛活性部位。此活性部位外观性状为棕黄色油状物,初步判断为多含挥发油脂溶性成分。经GC/MS分析,该活性部位主要组分为桂皮醛和对乙酰氨基苯乙醚(非那西丁)。在筛选出活性部位的基础上,课题组随后对其相关药效和安全性进行了系统评价,探讨了其开发利用的可行性,并对其可能的作用机理进行了初步的研究。结果显示,筛选得到的退热止痛散活性部位,具有良好的解热镇痛药效,且该活性部位安全性好,毒性很低。以上研究表明,该活性部位具有良好的开发前景。本研究旨在退热止痛散活性部位开发利用价值得已确认的基础上,对其进行制剂开发研究,内容包括剂型选择、制剂工艺筛选、制剂稳定性研究及质量标准研究,以期开发出一种安全、有效、质量可控及稳定的中药新药。考虑到挥发油具有挥发性、亲脂性及对空气、光、热均较敏感等特点,因此选用软胶囊剂,以提高制剂的稳定性。研究目的基于退热止痛散活性部位前期研究工作的完成,本课题的研究目的如下：1、对退热止痛散活性部位进行质控研究；2、对退热止痛散活性部位进行软胶囊制剂的开发；3、研究建立退热止痛散活性部位软胶囊制剂的质控标准；4、对退热止痛散活性部位软胶囊制剂的稳定性进行考察。方法和结果1、退热止痛散活性部位的质控研究采用气相-质谱联用方法对活性部位进行了化学成分分析。对活性部位中的桂枝和羌活药材采用薄层色谱法,结合高效液相色谱法的梯度洗脱指纹图谱,对活性部位进行了定性鉴别。建立了高效液相色谱法测定活性部位中桂皮醛含量的定量方法,并对其进行了方法学考察,结果表明此方法精密度及重现性良好,回收率较高,桂皮醛含量为6.521%。2、退热止痛散活性部位软胶囊制剂研究实验室制备软胶囊胶皮和囊内物,将胶皮浸入囊内物模拟软胶囊,在室温和40℃环境下贮存,并在第0、3、10、20天取出测定胶皮的崩解度。对处方1组(囊内物为花生油)、处方2组(囊内物为花生油和活性部位混合物)进行比较和方差分析。结果显示,不同处方组之间的胶皮崩解时间有显著性差异(P=0.000,F=27.771)；另处方3组(囊内物为活性部位)出现未崩解现象,从直观数据看出以胶皮浸入花生油中的崩解度为对照,胶皮浸入活性部位、活性部位与花生油混合物中均出现崩解时间延长现象。针对模拟软胶囊实验中出现的胶皮崩解迟缓现象,本实验将活性部位制成包合物,使其包裹于环糊精中,然后制备软胶囊。采用正交设计法对退热止痛散活性部位β环糊精包合工艺进行了优选,比较了不同方法的包合率、收得率。包合工艺研究结果表明,饱和水溶液法,各因素对β-CD的包合效果均无显著性影响(P=0.125,F＝7.023：P=0.460,F=1.173：P=0.501,F=0.995)。最佳包合工艺条件为A2：B3：C1,即搅拌温度为40℃,搅拌时间2h,活性部位与p-CD比例为1：8(g/g)。超声法,超声时间A因素的影响有显著性差异(P=0.013,F=73.402),加水量B因素和活性部位比例C因素无显著性影响(P=0.125,F=7.023：P=0.220,F=3.539)。选择最佳的包合工艺条件为A1：B1：C2,即超声时间2h,加水量为β-CD量的15倍,活性部位与β-CD比例为1：6(g/g)。研磨法,活性部位比例A因素和研磨时间B因素有显著性差异(P=0.006,F＝166.032；P=0.033,F=29.555),加水量C因素无显著性影响(P=0.157,F=5.387)。选择最佳的包合工艺条件为A2：B2：C1,即研磨时间2h,加水量为β-CD量的4倍,活性部位与β环糊精(β-CD)比例为1：8(g/g)。选择饱和水溶液法制备的包合物再次进行软胶囊预实验,实验室制备软胶囊胶皮和囊内物,将胶皮浸入囊内物模拟软胶囊,在室温和40℃环境下贮存,并在第0、3、10、20天取出测定胶皮的崩解度。对处方1组(囊内物为花生油)、处方2组(囊内物为花生油和包合物混合物)进行比较和方差分析,结果显示,囊内物含活性部位的处方2组的胶皮崩解时间对比处方1组,无统计学差异(P=0.092,F=3.016)。可见将活性部位用β-环糊精包埋后,能有效改善胶皮的崩解问题,避免了囊内物与胶皮之间交联反应,从而增加了软胶囊的稳定性。在软胶囊囊内物的处方筛选研究中,对基质种类和用量、湿润剂大豆磷脂的用量进行了考察,得囊内物最佳处方为：大豆汕和活性部位包合物比例为1.5：1,加入1%的大豆磷脂.混合研匀,即得。3、退热止痛散活性部位软胶囊制剂质量标准研究制剂质量标准研究方面,对活性部位软胶囊中桂枝和羌活药材的相关成分采用薄层色谱法,结合高效液相色谱法的梯度洗脱指纹图谱,对制剂进行了定性鉴别。采用高效液相色谱法测定活性部位中桂皮醛的含量,制定了较为完善的质量标准。4、退热止痛散活性部位软胶囊制剂稳定性考察对该制剂进行了稳定性考察,通过常温留样观察和加速实验,根据质量标准方案进行了观察,结果表明,退热止痛散活性部位软胶囊制剂稳定性良好。结论退热止痛散活性部位为油性物质,且具有一定气味和挥发性,软胶囊同其它固体剂型相比具有有效成分含量高、生物利用度高、吸收迅速、稳定性好、能有效掩盖中药挥发性成分的不良气味等优点,因此软胶囊作为退热止痛散活性部位制剂开发的剂型选择合理可行。由于活性部位与软胶囊胶皮接触出现胶皮崩解迟缓现象,推测为活性部位中桂皮醛成分与胶皮发生交联反应所致,因此,采用包合技术将活性部位包裹于β环糊精中再制备软胶囊。包合工艺研究结果表明,研磨法优选的最佳包合工艺较为理想,包合率、收得率较高；饱和水溶液法优选的最佳包合工艺仅次于研磨法,且其工艺更适合于实际生产,因此最终选择饱和水溶液法作为退热止痛散活性部位的β环糊精包合工艺。经过包合物软胶囊再次的预实验,结果表明,退热止痛散活性部位经β环糊精包合后克服了胶皮崩解迟缓现象,明显改善了软胶囊的稳定性。退热止痛散活性部位软胶囊制剂的质量标准及稳定性研究结果表明,该制剂质量是可控的,并具有良好的稳定性,符合制剂开发的有关要求。该文研究结果表明,退热止痛散活性部位软胶囊制剂的开发研究是可行的,可为基于以上研究的医院制剂开发或中药新药开发打下坚实的基础。