论文部分内容阅读
目的:建立痛风相关基因单核苷酸多态性(SNP)位点的基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF)分子诊断方法,完成48个SNP位点的分型检测并验证其在西北地区痛风人群的遗传易感相关性。对MALDI-TOF基因分型的结果进行评价与对比,完成MALDI-TOF与PCR-HRM的方法学评价。方法:通过软件设计48个SNP位点的特异性扩增引物以及单碱基延伸引物,建立基于MALDI-TOF技术的分子诊断方法,对400份痛风样本的48个SNP位点进行检测,使用统计软件对病例组和对照组的基因型及等位基因频率进行分析。将MALDI-TOF分型结果与PCR-HRM分型结果进行对比,以Sanger测序结果为“金标准”评价两个方法的差异性及检测性能。结果:(1)所建立的MALDI-TOF检测体系完成了对400份样本的48个SN P位点的检测,总体成功率为99.73%(19148/19200),有7个位点的52个基因型检测失败。21个基因中有12个基因的19个SNP位点等位基因携带者痛风发病风险增加;其中11个基因的19个SNP位点等位基因携带者痛风发病风险降低。(2)MALDI-TOF方法检测结果与PCR-HRM方法检测结果一致率为96.27%,一致结果与Sanger测序相比准确率为100%。结论:本研究所建立的MALDI-TOF分子诊断方法可进行高通量快速基因分型,检测成功率较高。ABCG2、APOA4、APOBEC4、TNRC6C、PTGR2、PKD2、ZNF410、FAM161B、EXOC3L2、TMC6、RGS20、SLC22A12、ENTPD5、GCKR、SLC2A9、SLC17A1基因多态性与西北地区人群痛风的遗传易感性相关。MALDITOF方法适用于人群大样本多个位点的科学研究,PCR-HRM方法适用于常规实验室进行科研和临床诊断。