论文部分内容阅读
目的胃癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一,其发病机制尚不明确。在我国多数患者处于进展期,预后不良,各种长链非编码RNA参与胃癌的发展、侵袭和转移。长链非编码RNA(long non-protein codingRNA,lncRNA)是非蛋白编码RNA的一种,定义为长度大于200nt的非编码RNA。研究表明lncRNA能够参与胃癌生物学过程,包括染色质重塑、细胞分化和免疫应答。LINC01133是新发现的lncRNA,在胃癌发展过程的作用仍然不明确。本项目主要研究LINC01133在胃癌组织中的表达情况和对体外培养的胃癌细胞增殖、周期、凋亡,转移及侵袭的影响。方法1、qRT-PCR检测30例胃癌组织及其相应癌旁组织LINC01133的表达,并进行LINC01133的差异表达与临床病理特征相关性分析。2、qRT-PCR检测正常胃黏膜上皮细胞GES-1和人胃癌细胞株MGC-803、BGC-823中LINC01133的表达水平。3、LINC01133过表达载体构建并转染到MGC-803人胃癌细胞株,LINC01133干扰载体的构建并转染到BGC-823人胃癌细胞株。再将细胞实验分组为:1)NC组(MGC-803转染过表达空载体组)。2)LINC01133组(MGC-803转染LINCO1133-pcDNA3.1质粒组)。3)sh-NC组(BGC-823转染干扰空载体组)。4)sh-LINC01133-1组(BGC-823转染siRNA-LINC01133组)。采用CCK-8法检测细胞增殖、流式细胞术检测细胞周期和凋亡、wound划痕实验检测细胞迁移和transwell实验检测细胞侵袭。结果1、检测的30例胃癌组织及其配对的癌旁组织中,胃癌组织中LINC01133的表达水平明显低于癌旁正常组织,P<0.001。2、GES-1和BGC-823中LINC01133表达水平无显著差异,P>0.05;而MGC-803中LINC01133的表达较GES-1和BGC-823细胞株中的表达低,具有显著性差异,P<0.001。3、CCK-8法检测高表达LINC01133的MGC-803,LINC01133组细胞存活率(81.11%±0.82%)较NC组细胞存活率(95.78%±0.92%)比例明显降低,差异具有显著性,P<0.05。CCK-8法检测干扰LINC01133表达的BGC-823,sh-LINC01133-1组细胞存活率(72.44%±3.72%)较sh-NC组细胞存活率(60.43%±0.31%)比例明显升高,差异具有显著性,P<0.05。4、流式细胞术检测高表达LINC01133的MGC-803,LINC01133组细胞较NC组细胞出现了G2期上调。流式细胞术检测了干扰LINC01133的BGC-823,sh-LINC01133-1组细胞在G1期较sh-NC组细胞比例明显降低。5、流式细胞术检测高表达LINC01133的MGC-803,NC组细胞组凋亡率(24.25%±3.69%)较LINC01133组细胞凋亡率(90.07%±5.16%)明显降低,P<0.05。流式细胞术检测干扰LINC01133的BGC-823,sh-NC组细胞组凋亡率(75.03%±0.99%)较sh-LINC01133-1组细胞凋亡率(70.23%±2.51%)升高,P<0.05。6、划痕实验检测高表达LINC01133的MGC-803,LINC01133组细胞的迁移速率(1.61±0.16,μm/h)较NC组迁移速率(2.51±0.11,μm/h)下降,P<0.05。划痕实验检测干扰LINC01133的BGC-823,sh-LINC0113-1组的迁移速率(3.09±0.14,μm/h)较sh-NC组迁移速率(1.64±0.44,μm/h)上升,P<0.05。7、Transwell侵袭实验来检测高表达LINC01133的MGC-803,LINC01133组细胞的侵袭定量(0.1697±0.0007)较NC组(0.2083±0.0003)下降,P<0.05。transwell侵袭实验来检测干扰LINC01133组的BGC-823后,sh-LINC01133-1组的侵袭定量(0.2077±0.0007)较sh-NC组(0.1831±0.0012)升高,P<0.05。结论LINC01133在胃癌组织中低表达,可促进胃癌细胞的增殖、迁移、侵袭及抑制细胞凋亡。LINC01133在胃癌发展中发挥抑癌基因的作用,有望成为研究胃癌发展新的相关靶点。