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水通道蛋白(aquaporins,AQPs)是一组介导水跨生物膜转运的细胞膜转运蛋白，对保持细胞内外环境的稳态平衡起重要作用。到目前为止已分离出的水通道家族有10个成员，存在于多种组织细胞膜上，研究证明水通道在体内液体转运和某些腺体分泌方面有重要作用，而且其表达异常也与机体的某些病理生理状态变化密切相关。肺组织中主要有四种水通道蛋白的分布，即AQP1、AQP3～5，参与肺脏不同部位的水分子运动。肺脏的许多生理功能都有水分子的参与，同时许多肺脏疾病，如急性肺损伤、肺水肿等也涉及肺内水运动平衡的紊乱，因此深入研究肺内水通道蛋白的分布及其病理生理意义有助于对急性肺损伤发病机制的进一步认识。急性肺损伤(ALI)是由多种致病因子启动，各种炎症细胞和细胞因子参与并相互作用以促进病程发展，最终导致以肺为主要靶器官伴有多脏器损伤的炎症性疾病。近几年我们就心房钠尿肽(ANP)、降钙素基因相关肽(CGRP)对急性肺损伤的治疗作用做了大量研究。ANP、CGRP是近年来倍受关注的血管活性物质，具有较强的扩血管、改善微循环、抑制炎性细胞因子释放等多种作用。不仅参与机体许多重要功能的调节，而且对多种组织器官有保护作用。我们已有动物实验证实，ANP、CGRP可有效地治疗急性肺损伤，但其作用机制还不十分明确。本实验通过复制油酸型急性肺损伤模型，并利用ANP、CGRP有效地治疗急性肺损伤，研究急性肺损伤大鼠肺组织AQP1的表达变化及ANP、CGRP对其影响，探讨ANP、CGRP治疗急性肺损伤的可能机制，为利用ANP治疗急性肺损伤提供理论基础。第四军医大学硕士学位论文 方法: 复制AL工大鼠模型，将实验动物随机分为对照组，ALI模型组，ANP治疗组，CGRP治疗组。采用免疫组化、Western Blot的方法检测各组大鼠肺组织中AQPI的分布及表达变化，并测定各组大鼠动脉血氧分压(Pa02)，肺湿/干(W/D)比值，同时进行肺组织病理染色。 结果: 1.动脉血氧分压(Pa姚)变化ALI模型组Pa02(8.7士0.SKpa)较对照组 (12.6士0.SKpa)显著下降，ANP治疗组(10.3士1.OKpa)、CGRP治疗组PaOZ(1 0.6士1.ZKpa)显著高于ALI模型组。 2.肺湿/干(W/D)比值的变化ALI模型组W/D(4.52士0.18)显著高于对照组(4.07士0.16)，而经ANP、CGRP治疗后，W/Dt匕ALI模型组明显降低，分别为4.25士0.14和4.22士0.21。 3.AQPI免疫组化检测AQPI主要表达于肺微血管内皮细胞，肺泡上皮细胞也有少量表达， ALI模型与对照组相比AQPI表达明显减弱，ANP治疗组、CGRP治疗组较ALI模型AQPI表达显著加强。 4.Western B10t结果各组AQPI蛋白电泳带存在着面积不等，深浅不等的差别。ALI模型组与对照组相比AQPI灰度值明显减弱，ANP治疗组、CGRP治疗组较ALI模型组AQPI灰度值显著加强。 5.病理学改变ALI模型组大鼠光镜下可见肺间质增宽、水肿、出血，并有以大量中性粒细胞为主的炎性细胞的浸润，肺泡结构破坏。ANP治疗组、CGRP治疗组较ALI模型组病理学改变减轻。正常对照组肺泡结构清晰，无渗出。 结论: 1.本实验采用经颈外静脉注入油酸(0 .05耐·kg一，)后，大鼠出现肺脏肿胀，出血，肺间质增宽，水肿，炎性细胞浸润等病理改变，并且Pa02下降，肺湿/干(W/D)比增高，表明ALI模型复制成功。 2.经静脉注入ANP、CGRP后，PaOZ改善，肺湿/干(W/D)比降低，病理学改变减轻，说明ANP、CGRP对ALI有较好的治疗作用。第四军医大学硕士学位论文 3.AQPI的表达量在ALI模型组较正常组显著下降，因而我们推测，AQPI的表达减少导致水肿液跨细胞膜的重吸收能力下降，这可能是造成急性肺损伤时肺水肿发生，发展的原因之一。经ANP、CGRP治疗后，AQPI的表达较ALI模型组显著增加，提示ANP、CGRP通过调节AQPI的表达，导致水从间质回流入血管系统，促进了水肿的吸收，从而治疗急性肺损伤。