目的年龄相关性白内障(age related cataract,ARC)发生机制复杂,氧化应激与之关系密切。巯基转移酶(thioltransferase,TTase)在体内抗氧化防御体系中发挥着关键作用,其在晶状体上皮细胞的表达影响着晶状体氧化还原状态的平衡和晶状体蛋白构象的稳定,而与晶状体透明性的维持密切相关。本实验从蛋白水平和分子水平研究TTase在年龄相关性白内障患者以及正常人晶状体上皮细胞中的表达和活性,探讨白内障发生机制,为进一步研究白内障药物预防和治疗提供新的线索。方法收集年龄相关性白内障患者施行超声乳化术中环形撕囊所得的晶状体前囊膜104例110眼,设为实验组,并根据年龄相关性白内障的临床类型分为皮质性、核性和后囊膜下性三组,分别为皮质性白内障35例38眼、核性白内障39例42眼、后囊膜下性白内障30例30眼,标本无菌取下后立即放入液氮中保存。同法收集透明晶状体前囊膜9例12眼作为对照。纳入标准:实验组为由同一经验丰富医师确诊为年龄相关性白内障的患者并进行分组,除外高度近视史、长期放射线接触史及其它眼病和全身性疾病;对照组为尸体眼并排除其它眼部疾患,或外伤至晶状体脱位的患者且显微镜下见晶状体尚透明。通过Western-blotting和RT-PCR技术检测各组晶状体前囊膜下上皮细胞蛋白和TTase mRNA的表达情况,以β-actin为内参照标化检测指标含量,比较各组之间TTase表达的差异。数据以均数±标准差( x±s)表示,利用SPSS10.0软件进行统计学分析,采用单因素方差分析,实验组与对照组间比较采用Dunnett t检验,实验组间比较采用LSD法,p<0.05作为差异具有统计学意义。结果1.Western-blotting结果显示:蛋白质十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)以及蛋白印迹免疫分析,显示TTase分子量大小约为11KDa,年龄相关性白内障组和对照组晶状体前囊膜下上皮细胞中都有TTase蛋白不同程度表达;2.PCR扩增显示:年龄相关性白内障组和对照组晶状体前囊膜组织中均检测到目的基因TTase和内参基因β-actin的表达,基因扩增产物长度均符合GenBank中核酸序列;3.半定量RT-PCR结果显示:晶状体前囊膜下上皮细胞中TTase mRNA的相对量分别为年龄相关性白内障皮质组1.36±0.16,核组1.03±0.11,后囊膜下组1.46±0.12,正常对照组2.01±0.14。年龄相关性白内障组晶状体前囊膜下上皮细胞TTase mRNA表达低于正常对照组,经统计学分析,差异具有显著性意义(p<0.05);皮质性白内障和核性白内障、核性白内障和后囊膜下性白内障晶状体前囊膜下上皮细胞的表达差异具有显著性意义(p<0.05);皮质性白内障和后囊膜下性白内障晶状体前囊膜下上皮细胞的表达无显著性意义(p>0.05)。结论本实验利用Western-blotting和RT-PCR技术检测TTase在年龄相关性白内障患者和正常人的晶状体前囊膜下上皮细胞表达情况得出结论如下:1、TTase在年龄相关性白内障患者晶状体前囊膜下上皮细胞中有表达且比正常人低;2、TTase在年龄相关性白内障皮质性、核性和后囊膜下性三种不同临床类型的表达不同,核性白内障晶状体前囊膜下上皮细胞中的表达较低;3、未见年龄相关性白内障晶状体前囊膜下上皮细胞TTase活性降低与年龄呈线性关系。