第一部分FGF9对RANKL体外诱导破骨细胞分化的影响及其机制探讨目的:利用经RANKL体外诱导的破骨细胞,观察FGF9对破骨细胞分化的影响并探讨其可能机制。方法:利用RANKL诱导原代单核细胞法体外培养破骨细胞,细胞因子M-CSF、RANKL的浓度分别为30ng/ml,50ng/ml。采用两种方法研究FGF9对破骨细胞的影响:(1)取4周龄FGF9WT/WT(WT)和FGF9WT/S99N(HE)小鼠各两只,利用RANKL诱导原代单核细胞法体外培养破骨细胞。(2)在诱导过程中分别加入不同浓度(10ng、20ng、50ng)的FGF9蛋白,将未加入FGF9蛋白的作为对照组。定期更换培养液及诱导因子和相应浓度的FGF9蛋白,直至破骨细胞分化成熟。行TRAP染色鉴定破骨细胞。倒置相差显微镜下观察各组破骨细胞的形态并拍照。利用Image Pro Plus 6.0软件测量每视野破骨细胞数量,并利用SPSS 21.0统计软件进行分析和检验并绘制柱形图。通过Real-Time PCR技术检测FGF9对破骨细胞分化相关基因Trap、Mmp9、Ctsk表达量的影响。结果:(1)镜下观察可见WT组和HE组,10ng、20ng、50ng组和对照组均有形态不规则、多核的TRAP染色阳性的破骨细胞生成,实验组(10ng、20ng、50ng组)与对照组相比,生成的TRAP染色阳性的破骨细胞体积更大,数量更多,胞浆更为伸展。统计分析后显示,WT组的破骨细胞多于HE组,且差异具有统计学意义(P<0.05);20ng组生成的破骨细胞数目最多,10ng次之,对照组生成的破骨细胞数目最少,实验组各组与对照组相比,差异均有统计学意义(分别为P<0.05,P<0.005,P<0.05)。(2)破骨细胞分化相关基因(Trap、Mmp9、Ctsk)m RNA表达水平在两组间比较显示,与WT组相比,Trap和Mmp9 m RNA表达水平在HE组均明显下调(P<0.05,P<0.001)。结论:成纤维细胞生长因子9(FGF9)可促进破骨前体细胞向破骨细胞的分化,并且其促进作用与浓度无相关性。其作用机制可能通过影响破骨细胞分化相关基因Trap和Mmp9的转录水平进而影响破骨细胞的分化。第二部分老年男性血清维生素D与甲状旁腺激素及骨代谢指标的相关性研究目的:探讨老年男性血清维生素D水平,及其与甲状旁腺激素及骨代谢指标的相关性。方法:收集2010年9月至2013年9月在上海瑞金医院老年病科病房住院及门诊患者895例,平均年龄为76岁。测定其血清25-羟基维生素D[25-(OH)D]、血钙(Ca)、血磷(P)、甲状旁腺激素(PTH),I型原胶原分子N-端前肽(PINP)及β-I型胶原C端肽(β-CTX)水平。根据血清25-(OH)D水平将患者分为维生素D严重缺乏组(<25nmol/L),维生素D缺乏组(25-50 nmol/L),维生素D不足组(50-75 nmol/L)和维生素D充足组(>75 nmol/L)。结果:(1)895例老年男性患者年龄60~99岁,平均年龄76岁。血清25-(OH)D平均值为(43.52±21.97)nmol/L。维生素D缺乏者(≤50nmol/L)为592位(67%);维生素D不足者(50-75 nmol/L)为223人(25%);维生素D缺乏或不足者高达92%;维生素D充足者(>75 nmol/L)仅为80人(8%)。(2)不同年龄段血清25-(OH)D的比较显示,血清25-(OH)D水平随增龄而逐渐降低。60~69岁组25-(OH)D值最高,为(46.27±20.76)nmol/L,与其它各组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。相关分析表明,血清25-(OH)D与年龄呈负相关(相关系数r=-0.088,P=0.008)。(3)甲状旁腺素(PTH)的平均水平为(55.74±29.06)pg/ml。相关分析显示,25-(OH)D与PTH、PINP、β-CTX均呈负相关(r值分别为:—0.209,-0.109,-0.122,P均<0.05)。血25-(OH)D与Ca呈正相关(r=0.206,P=0)。血25-(OH)D与BMI、P均无相关性(P均>0.05)。结论:老年男性存在严重的维生素D缺乏或不足。血25-(OH)D与PTH、年龄、PINP、β-CTX均呈负相关。