【摘 要】
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目的:氧化应激与缺血性脑卒中具有密切相关性,研究发现仙茅具有良好的氧化应激保护作用,其具有对缺血性脑卒中的潜在治疗作用。本实验对仙茅提取物（EC）进行研究,以评价其对脑缺血再灌注大鼠的神经保护作用。方法:1.EC的制备:将仙茅药材粉碎成粗粉,用浓度为70%的乙醇加热回流两次。第一次加仙茅5倍量的70%浓度的乙醇,加热回流2h,滤过。第二次加仙茅4倍量的70%浓度的乙醇,加热回流2h,滤过。合并两次
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目的:氧化应激与缺血性脑卒中具有密切相关性,研究发现仙茅具有良好的氧化应激保护作用,其具有对缺血性脑卒中的潜在治疗作用。本实验对仙茅提取物（EC）进行研究,以评价其对脑缺血再灌注大鼠的神经保护作用。方法:1.EC的制备:将仙茅药材粉碎成粗粉,用浓度为70%的乙醇加热回流两次。第一次加仙茅5倍量的70%浓度的乙醇,加热回流2h,滤过。第二次加仙茅4倍量的70%浓度的乙醇,加热回流2h,滤过。合并两次滤液,浓缩,即得。2.脑缺血再灌注大鼠模型的制备:通过大脑中动脉闭塞再灌注法（MCAO）建立脑缺血再灌注大鼠模型。3.分组与实验指标测量:选取雄性SD大鼠,适应性饲养3天,分为假手术对照（Sham）组、模型对照（MCAO）组、EC低剂量（EC-L）组（1.05g/kg/d）、EC中剂量（EC-M）组（2.1g/kg/d）、EC高剂量（EC-H）组（4.2g/kg/d）。连续经口灌胃给药7天,其中Sham组和MCAO组给予蒸馏水（1ml/100g/d）灌胃。术后24h进行神经行为学评分,麻醉后将鼠处死,取脑,放入脑模具中,连续切成6片2cm厚的切片,TTC染色以测定脑梗死体积。将另一部分鼠取脑,取缺血半暗区,用生化试剂盒检测超氧化物歧化酶（SOD）的活性及丙二醛（MDA）含量以分析抗氧化水平,然后运用MOE软件对EC的主要活性成分与ERK2作用靶点进行分子对接研究,并用Western blotting检测大鼠缺血半暗区中p-ERK蛋白和Nrf2蛋白的表达水平。结果:1.神经行为学评分:与MCAO组相比,EC-L、EC-M、EC-H组大鼠的神经行为学评分显著增加（P<0.05）。2.脑梗死体积:与MCAO组相比,EC-L、EC-M、EC-H组大鼠的脑梗死体积显著性减小（P<0.05）。3.抗氧化指标:EC-H组大鼠缺血半暗区中SOD活力与MCAO组相比显著性提高（P<0.05）、EC-H组大鼠缺血半暗区中MDA含量与MCAO组相比显著性降低（P<0.05）。4.分子对接结果:EC的主要活性成分仙茅苷能够与ERK2残基形成较强的相互作用力。5.蛋白表达水平:EC-H组大鼠缺血半暗区内p-ERK、Nrf2蛋白的表达水平与MCAO组相比未见明显差异（P>0.05）。结论:EC可通过抗氧化作用,使脑缺血再灌注大鼠的缺血半暗区SOD活性增加、MDA含量降低,减轻氧化损伤,从而起到对脑缺血再灌注大鼠的神经保护作用。EC能够改善脑缺血再灌注大鼠的神经功能缺损,减小脑梗死体积,具有预防和治疗缺血性脑卒中的潜力,EC抗氧化机制有待进一步研究。
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