脂肪干细胞用于组织工程血管构建的细胞分化研究

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血管移植是目前临床上治疗动脉粥样硬化等血管类疾病的主要手段,一般选用内乳动脉或自体大隐静脉作为材料,但可以移植的自体血管数目有限,并且很大一部分患者不适合进行自体血管移植。人工合成血管如涤纶和聚四氟乙烯在大中直径血管(内径>5mmm)移植中已获得成功,但在小直径血管(内径<5mm)移植中因其高剪切力和低血流量,容易形成血栓和内膜增生,远期通畅率低,且无降解性和促进组织再生的能力,长期移植生物相容性很差等问题。近年来,组织工程学的发展为研究可降解、生物相容性良好的小直径血管支架提供了新途径。脂肪干细胞(ADSC)的分化潜能和骨髓间充质干细胞(MSC)类似,能在体外培养中分化为多种中胚层来源的细胞,如成骨细胞、软骨细胞、肌细胞等。脂肪干细胞具有取材容易,可以通过抽脂法获得,创伤小而且供应充足,能反复取材,也不会引起道德争论。并且,脂肪干细胞具有增殖快速的优点,因此作为组织工程种子细胞具有非常大的优势,应用前景广阔。本研究利用脂肪干细胞的多向分化性能,原位转染诱导其在不同基因诱导条件下分别向血管内皮细胞和血管平滑肌细胞分化。我们选用了明胶制作二维膜,利用PEI作为转染载体,制成了具有高转染效率的组织工程支架。VEGF质粒活化后诱导ADSC向血管内皮细胞分化;PDGF质粒活化后的支架可诱导ADSC向血管平滑肌细胞分化。通过观察细胞在支架上的生长状态,ELISA检测因子表达,Q-PCR检测血管细胞标志性物的表达,来判断ADSC在支架上生长和分化。细胞计数结果显示基因活化材料能够很好支持ADSC的贴附和增殖;VEGF-165因子的ELISA测定结果显示该系统是一个理想的的原位转染系统,为诱导ADSC向血管细胞分化提供了细胞因子的保障。相比未基因活化的支架,Q-PCR结果显示在向血管内皮分化体系中,诱导后的ADSC血管内皮细胞标志分子CD31和Vwf的mRNA表达量明显上调。在向血管平滑肌分化体系中,血管平滑肌细胞标志分子cnnl和α-SMA的mRNA表达量也显著上调。本研究初步确定了在合适的诱导条件下,ADSC可分别向血管内皮细胞和血管平滑肌细胞分化;为取材方便且应用前景广阔ADSC应用于血管组织工程提供了充分的实验证据。
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