论文部分内容阅读
B类Ⅰ型清道夫受体(scavengerreceptorclassBtypeⅠ，SR-BI)是第一个在分子水平上证实的位于细胞膜表面的高密度脂蛋白(highdensitylipoprotein，HDL)受体。SR-BI有多种配体，它可以介导胆固醇和其他脂质在HDL和细胞之间进行转运[1][2]。逆向胆固醇转运(reversecholesteroltransport，RCT)是HDL介导的一种从外周组织向肝脏转运多余胆固醇的过程[3]。RCT在体内有多个步骤，其中第一步就是肝外组织细胞中的未酯化胆固醇流出到HDL，而最后一步则是HDL中的胆固醇酯经选择性吸收而转运到肝脏的过程[4]。作为HDL的唯一受体，SR-BI在RCT中起着十分重要的作用。本研究拟在动脉粥样硬化小型猪模型上观察肝脏和血管SR-BI表达的变化，然后采用ox-LDL、LDL及HDDL别处理肝HepG2细胞和肝外THP-1巨噬细胞，观察细胞水平上SR-BI的表达及细胞内胆固醇转运的变化，为进一步阐明SR-BI在动脉粥样硬化发生发展中的作用提供实验依据。
第一部分：动脉粥样硬化小型猪SR-BI表达的变化。目的：探讨动脉粥样硬化小型猪肝脏和主动脉组织中SR-BI表达的变化。方法：采用饲喂高脂高胆固醇饲料的贵州小香猪为研究对象，喂养12个月后处死动物，采用油红O和HE染色检测肝脏蓄脂情况及动脉粥样斑块病变，逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western印迹和免疫组织化学法分别检测肝脏和主动脉组织中SR-BImRNA和蛋白质的表达。结果：油红O及HE染色可见动脉粥样硬化小型猪肝脏有大量的脂肪空泡，动脉有明显的脂质条纹及斑块。采用RT-PCR、Western印迹与免疫组织化学分别检测组织SR-BImRNA和蛋白质的表达，结果显示，与对照组小型猪比较，动脉粥样硬化小型猪肝组织和主动脉组织的SR-BImRNA及蛋白质的表达上调(P＜0.05)。结论：高脂高胆固醇饮食上调小型猪肝组织和主动脉组织SR-BI的表达。
第二部分：OX-LDL、LDL和HDL对HepG2细胞与THP-1巨噬细胞SR-BI表达的影响。目的：研究ox-LDL、LDL和HDL对HepG2细胞和THP-1巨噬细胞SR-BI表达及细胞内胆固醇转运的影响。方法：用50μg/ml的氧化低密度脂蛋白(oxidizedlowdensitylipoprotein，ox-LDU、低密度脂蛋白(lowdensitylipoprotein，LDL)和HDL分别处理HepG2细胞，采用油红O染色检测HepG2细胞中脂质的蓄积情况，用液体闪烁计数法检测HepG2细胞胆固醇的流入，高效液相色谱法检测HepG2细胞中总胆固醇含量，用RT-PCR、Western印迹法分别检测HepG2细胞中SR-BImRNA和蛋白质的表达。THP-1细胞用160nmol/L佛波酯孵育24h，诱导分化成巨噬细胞后，再用50μg/ml的ox-LDL、LDL和HDL分别处理，用RT-PCR、Western印迹法分别检测THP-1巨噬细胞上SR-BImRNA和蛋白质的表达。最后，分别用50、100、150μg/ml的HDL与50μg/ml的ox-LDL与THP-1巨噬细胞共同孵育，用液体闪烁计数法检测THP-1巨噬细胞胆固醇的流出，RT-PCR、Western印迹法分别检测THP-1巨噬细胞中SR-BImRNA和蛋白质的表达。
结果：用50μg/ml的ox-LDL、LDL、HDL处理HepG2细胞24h后，与对照组相比，油红O染色发现各脂蛋白处理组的HepG2细胞中脂滴均增多，以HDL处理组增加最为明显；液体闪烁计数法检测到各脂蛋白处理组的HepG2细胞胆固醇的流入增加，以HDL组最为明显，达到32.68％；高效液相色谱法检测到对照组细胞内总胆固醇含量为43.18±7.80mg/g蛋白，而ox-LDL、LDL、HDL处理组的HepG2细胞中总胆固醇含量分别为113.01±15.90、171.13±20.01、220.39±28.00mg/g蛋白；RT-PCR、Western印迹法分别检测到各脂蛋白处理组的HepG2细胞中SR-BImRNA和蛋白质的表达均增高。THP-1巨噬细胞用510μg/ml的ox-LDL、LDL、HDL处理24h后，RT-PCR、Western印迹法检测发现，ox-LDL可以下调THP-1巨噬细胞中SR-BImRNA和蛋白质的表达，LDL的作用不明显，而HDL则可以上调THP-1巨噬细胞中SR-BImRNA和蛋白质的表达。再分别用50、100、150μg/ml的HDL与50μg/ml的ox-LDL和THP-1巨噬细胞共同孵育，液体闪烁计数法检测发现ox-LDL减少THP-1巨噬细胞中胆固醇的流出，HDL可以增加THP-1巨噬细胞胆固醇的流出；RT-PCR、Western印迹法检测发现HDL可以上调THP-1巨噬细胞中SR-BImRNA和蛋白质的表达，HDL的这些效应都呈浓度依赖性。结论：结果提示，ox-LDL、LDL、HDL可以上调HepG2细胞上SR-BI的表达，并增加细胞内胆固醇的含量；ox-LDL下调THP-1巨噬细胞SR-BI的表达，促进巨噬细胞内胆固醇蓄积；HDL则可以上调THP-1巨噬细胞SR-BI的表达，促进巨噬细胞内胆固醇流出，并且这种作用随HDL浓度的增加而增强。