【摘 要】
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用滚环扩增技术(Rolling circle amplification,RCA)放大双生病毒的靶核酸信号进而利用限制性内切酶片段长度多态性(RFLP)建立了检测不同类型双生病毒的新技术体系。研究结果
【出 处】
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浙江大学农业与生物技术学院 浙江大学
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用滚环扩增技术(Rolling circle amplification,RCA)放大双生病毒的靶核酸信号进而利用限制性内切酶片段长度多态性(RFLP)建立了检测不同类型双生病毒的新技术体系。研究结果表明,利用RCA-RFLP可以有效的检测已知的单组份和双组份以及伴随有卫星的双生病毒。对采自浙江杭州地区的田间双生病毒样品的RCA-RFLP检测的结果与利用简并引物PA和PB进行PCR扩增的结果相吻合。相比传统的PCR检测方法,用RCA-RFLP体系检测双生病毒灵敏性更高、操作更为简便。根据本氏烟中的NbAGO1和NbAGO4基因序列设计特异引物,利用RT-PCR在本氏烟扩增了NbAGO1和NbAGO4基因的同源序列片断,通过序列比较发现这两个片断与公布的本氏烟中NbAGO1和NbAGO4类基因都有较高的同源性。将NbAGO1和NbAGO4片段引入改造的烟草脆裂病毒(TRV)RNA2沉默载体,获得了重组载体pTRV2-AGO1和pTRV2-AGO4。将pTRV2-AGO1或pTRV2-AGO4与RNA1载体(pTRV1)分别共同接种本氏烟,半定量RT-PCR分析发现本氏烟中NbAGO1 mRNA或NbAGO4 mRNA的积累被遏制,通过双生病毒接种、检测证明病毒诱导NbAGO1和NbAGO4沉默后,促进了双生病毒的复制。
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