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1 猪leptin长形受体(OB-Rb)目的基因的克隆及核酸探针的研制 根据Genebank上登录的leptin长形受体(OB-Rb)mRNA基因全序列，在其保守区设计一对引物。用Trizole法从长白三元杂交猪的下丘脑提取总RNA，然后用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法进行cDNA扩增，获得一条长343bp的目的基因片段，运用T-A克隆方法，将此片段连接到pGEM-Easy T载体，通过蓝白斑筛选、酶切和序列测定等方法进行重组质粒鉴定。最后的测序结果表明，获得的目的基因片段与发表的序列100％同源。用ApaⅠ和Sac Ⅰ酶使测序正确的重组质粒完全线性化后，以体外转录法合成OB-Rb反义和正义cRNA核酸探针，用斑点杂交法检测探针的浓度。检测结果表明，探针的浓度达到100ng／μl，满足杂交要求。 2 猪下丘脑内OB-Rb mRNA的分布定位 本实验用原位杂交法研究了5头2-3月龄长白母猪下丘脑OB-Rb mRNA的分布定位。研究结果表明，OB-Rb mRNA标记神经元主要分布于下丘脑的弓状核、腹内侧核、背内侧核、室旁核和室周核，在下丘脑外侧区也散在分布标记神经元。 3 猪大脑皮质、海马结构、梨状叶和杏仁核内OB-RbmRNA分布定位 本实验用原位杂交法研究了10头长白三元杂交猪大脑皮质、海马结构、梨状叶和杏仁核内OB-RbmRNA的分布定位。研究结果表明，大脑皮质和梨状叶内的OB-Rb mRNA标记神经元主要分布于Ⅱ-Ⅵ层，分子层偶见标记神经元。海马结构内的OB-Rb mRNA标记神经元主要位于海马的锥体细胞层和齿状回的颗粒层，在海马的始层和齿状回的多形层偶见标记神经元，在海马的辐射层和腔隙层罕见标记细胞。在杏仁核内，OB-Rb mRNA标记神经元主要见于皮质内侧核，在基底外侧核和中央核也有少量标记神经元。 4 猪丘脑、小脑和延髓内OB-Rb mRNA的分布定位 本实验用原位杂交法研究了5头长白三元杂交猪丘脑、小脑和延髓内OB-Rb mRNA的分布定位。结果表明，OB-Rb mRNA标记神经元在长白三元杂交猪丘脑、小脑和延髓内均有分布。在丘脑内，OB-Rb mRNA标记神经元几乎见于所有核团，在中线核群、丘脑室旁核和丘脑前核群内出现大量的QB－Rb mRNA标i己神经元，其余核团 OBRb mRNA标记神经元分布较少。在小脑，皮质三层中均有 OB－Rb mRNA标记神经元，以梨状神经元层和颗粒层分布密集。在延髓下橄榄核、孤束核、迷走神经副交感核和舌下神经核也有 OB．Rb mRNA标记神经元出现。 本文研究结果进一步肯定了别人在人、，啮齿类和羊上的研究结果丫丰富了脑内OB－Rb m洲A基因表达的资料，弥补了猪卤不同核团内 OB－Rb mMA分布定位资料的空白，为研究leptin的生物学作用及其作用机理提供了形态学基础，同时也为进一步研究OB－Rb与其它神经肽的共存关系奠定了基础。