论文部分内容阅读
目的：本研究旨在探讨mTOR/p70S6K/IRS-1信号通路在AD发病中的作用以及柚皮素能否通过影响该通路而改善AD模型大鼠的认知能力,希望为治疗AD提供新思路。方法：将90只成年雄性SD大鼠随机分为6组,即对照组、模型组、柚皮素(naringenin, N AR)大、中、小剂量组和罗格列酮(rosiglitazone, ROS)组,每组各15只。对照组于实验第1天和第3天侧脑室(intracerebro ventricular, ICV)注射生理盐水,其余各组侧脑室注射链脲佐菌素(streptozotocin, STZ) (3 mg/kg)制备AD模型。第1次侧脑室注射后开始药物灌胃,NAR大、中、小剂量组给予NAR (100、50、 25 mg/kg/d), ROS组给予ROS (5 mg/kg/d),而对照组和模型组则给予等体积0.5%羧甲基纤维素钠(sodium carboxymethylcellulose, NaCMC),持续5周。第36天应用Morris水迷宫检测大鼠空间学习、记忆能力；甲硫素S染色观察大鼠脑内Ap的沉积；运用免疫组化及Western blot检测大鼠脑内BACEK IRS-1、p-IRS-1Ser636、mTOR、 p-mTORSer2448、p70S6K和p-p70S6KThr389蛋白的表达；采用RT-PCR检测大鼠脑内IRS-1mRNA、BACE1mRNA、ADAM10mRNA和NEP mRNA表达。结果：(1)Morris水迷宫结果表明：与对照组相比,模型组和NAR小剂量组寻台潜伏期明显延长(P<0.01),穿台次数、目标象限停留时间明显减少(P<0.01)；而大、中剂量NAR和ROS干预后寻台潜伏期显著缩短(P<0.01),穿台次数、目标象限停留时间明显增加(P<0.01)。(2)甲硫素S染色结果显示：对照组大鼠脑内几乎未见Ap沉积；模型组和NAR小剂量组大鼠脑内可见大量Aβ沉积；而NAR大、中剂量组和ROS组大鼠脑内仅见少许Ap沉积,较模型组和NAR小剂量组明显减少。(3)Western blot和免疫组化检测显示：与对照组比较,模型组和NAR小剂量组大鼠脑内p-p70S6KThr389/p70S6K比值(P<0.01)、p-IRS-1Ser636/IRS-1比值(P<0.01)和BACE1表达明显升高(P<0.05)；大、中剂量NAR和ROS干预后能显著降低上述三个指标(P<0.01)。提示AD模型大鼠脑内存在mTOR/p70S6K/IRS-1信号通路的过度活化,而大、中剂量NAR和ROS能抑制该通路的过度活化。(4)RT-PCR结果表明：与对照组比较,模型组和NAR小剂量组大鼠脑内BACE1 mRNA表达显著增加(P<0.01),而ADAM10 mRNA和NEP mRNA表达几乎未见变化；大、中剂量NAR和ROS处理后BACE1 mRNA表达显著降低(P<0.01)。提示大、中剂量NAR和ROS能抑制BACElmRNA的表达。结论：(1)脑内过度活化的mTOR/p70S6K/IRS-1信号通路参与了AD的发病。(2)柚皮素能够通过抑制mTOR/p70S6K/IRS-1信号通路改善AD模型大鼠的认知能力。