史氏鲟热应激病变及HSP70 mRNA表达研究

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应激可引起动物应激性疾病,并造成不同程度的经济损失。本实验用32℃水造成史氏鲟热应激,研究热应激史氏鲟的形态学变化、血液生化指标变化以及组织中HSP70 mRNA的表达情况,为史氏鲟应激性疾病的诊断提供科学依据。将史氏鲟(45尾)分为对照组A与实验组B、C、D。在循环水体(18±1.0℃)中静养48h,A、B、C、D四组在32℃水中分别应激Oh、2h、4h、6h,丁香酚麻醉,采血,收集血清,进行生化指标的测定,包括总蛋白、白蛋白、球蛋白、谷草转氨酶、谷丙转氨酶、乳酸脱氢酶、肌酐、尿素氮、丙二醛。剖检史氏鲟,观察热应激史氏鲟大体病变。取肌肉、心脏、肠道等组织,10%福尔马林固定,石蜡切片,HE染色,观察组织学病变。采集鲟鱼心脏、肝脏、脾脏等组织器官,通过Real-time qPCR检测HSP70 mRNA的表达。实验结果表明:(1)眼观,热应激后,史氏鲟体表、内脏多种组织器官充血,以鳍、腹部、肠道最为明显。腹腔内脂肪明显出血。随应激时间延长充血处颜色逐渐变黑。镜下,心脏、肝脏、肾脏、胃、肠道、脑、皮下组织、鳃、鳍部、食管、脂肪均看见充血及黑色素沉着,心脏、肝脏、瓣肠酸性粒细胞明显增多。皮下、心脏、胃、鳍部等处肌肉发生明显的变性、坏死。(2)热应激后,各生化指标均先逐渐升高后降低。血清白蛋白在热应激2h达到最大值(8.20±0.39 g/L),实验组与对照组相比差异极显著(P<0.01);血清总蛋白、球蛋白、谷草转氨酶、谷丙转氨酶、尿素氮、丙二醛在热应激4 h 时达到最大值,分别为 21.34±0.62 g/L、15.67±0.50 g/L、1159.45±40.22 IU/L、98.72±8.87 IU/L、0.69±0.04 mmol/L、10.49±0.43 nmol/ml,实验组与对照组相比差异显著(P<0.05);血清内肌酐、乳酸脱氢酶分别在热应激4 h、2 h达到最大值,实验组与对照组差异不显著(P>0.05)。结果显示,血清总蛋白、白蛋白、球蛋白、谷草转氨酶、谷丙转氨酶、尿素氮、丙二醛对鲟鱼热应激的诊断具有一定的意义。(3)在生理状态下,史氏鲟体内组织器官中HSP70 mRNA相对表达量多少依次是肝脏、脾脏、心脏、脑、肾脏、肌肉、肠道。采集各组的肝脏、脾脏、心脏,测定其HSP70 mRNA相对表达量。结果显示,随着应激时间延长,HSP70 mRNA表达量呈逐渐升高趋势,对照组与实验组差异显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)。研究结果表明:热应激史氏鲟病变明显,以体表充血、肌纤维变性坏死、酸性粒细胞增多及黑色素沉着为特征;热应激史氏鲟血清总蛋白、白蛋白、球蛋白、谷草转氨酶、谷丙转氨酶、尿素氮、丙二醛含量升高;热应激史氏鲟肝脏、脾脏、心脏内HSP70 mRNA的相对表达量升高。
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