番茄红素高产菌株的选育

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番茄红素是类胡萝卜素的一种,具有抗氧化性和多种生理活性,是一种新型功能性天然色素,在食品、药品及医疗保健等方面有良好的应用前景。微生物发酵法生产所得番茄红素与番茄中番茄红素相比,其产品质量和生理活性完全相同,且发酵法成本低,污染相小。因此,筛选高产菌株、优化发酵条件,是实现工业化生产较理想的途径。本文主要研究了番茄红素的检测方法,番茄红素高产菌株的诱变筛选方法,进行了发酵工艺的优化。检测方法研究了HPLC法和722分光光度计发(比色法),确定HPLC检测番茄红素的试验条件为:色谱柱为伊力特ODS2 C18反相柱3.5X250mm,system gold 168检测器,检测波长472nm,流动相为甲醇:乙腈:二氯甲烷的混合溶液(4.5:4.5:1,v/v/v),流速1m/min,浓度与峰面积的线性方程为y=0.0001x+0.0453,线性相关系数R~2=0.9996,在10mg/L~50mg/L范围内,重复率回收率都符合要求;722分光光度计法(比色法):将破壁提取处理好的样品放在472nm波长下,在质量浓度为0~40mg/L时,质量浓度和吸光值的线性关系为y=0.0262x+0.0895,相关系数R~2=0.9961,重复性和回收率都符合要求。以菌株Y01-9为出发菌株,经过30瓦紫外灯40秒辐射,然后经过二苯胺初筛,比色法复筛,HPLC终筛,筛选到紫外诱变的高产菌株201b7,发酵效价为35.3mg/L,比原始菌株提高171.5%,然后以菌株201b7为出发菌株,进行DES诱变,筛选得到了高产菌株D21,发酵效价为47.1mg/L,比原始菌株提高262.6%,比出发菌株201b7提高33.5%。为了快速有效的筛选高产菌株,本文研究了二苯胺筛选法,二苯氨的浓度越高的筛选平板筛选出来的菌株发酵效价越高,当二苯胺的浓度为40μmol/L时,筛选出的高产菌株发酵效价都在25.8mg/L以上。还研究了高产菌株D21的发酵工艺,经过单因素试验和正交试验确定了菌株D21的最佳发酵培养基方案为蔗糖50g/L,草酸铵25g/L,酵母粉20g/L,发酵效价达到了47.1mg/L,比YPD培养基上发酵效价提高了33.4%。
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