鹅细小病毒病(Goose parvovirus infection)又称小鹅瘟(Gosling plague,GP)或Derzsy’s病,主要侵害4日龄至20日龄雏鹅和雏番鸭,可以引起急性肠炎及肝、肾、心等实质脏器败血性病变,尤其以小肠部位的纤维性、栓塞性病变为主要特征。由于该病病程短、传播快、死亡率高,造成了严重的经济损失,是目前危害养鹅业健康发展的重要传染病之一。由于该病每年均有不同程度的流行,长期困扰着养鹅业的健康发展,所以需要一种准确、简便的诊断方法来对该病作出准确诊断。本研究根据GenBank中鹅细小病毒(GPV)的7株全基因序列,在保守的NS区域设计了一对引物,以GPV-98E株鹅胚尿囊液的核酸提取物为模板,经优化反应条件,建立了检测GPV的特异性PCR方法。敏感性试验结果显示,该方法对GPV核酸的最小检出量为4.194pg,尿囊液的最小检出量为0.15个ELD50;特异性试验结果显示,采用该方法检测GPV能够扩增出与预期大小相符的476bp的特异性片段,而对作为对照的鸭肠炎病毒(DEV)、禽流感病毒(AIV)、鹅副粘病毒(GPMV)的核酸均未扩增出任何条带。并将其应用于临床检测,对52份临床感染的雏鹅的心、肝、肠等组织进行PCR扩增,能够检测到相应的特异性病毒核酸片段,表明建立的鹅细小病毒PCR检测方法具有敏感性高、特异性强的特点,具有潜在的临床应用价值。本研究用超离纯化的鹅细小病毒98E株免疫6周龄BALB/c雌性小鼠,免疫3次后取其脾细胞和骨髓瘤细胞SP2/0进行融合。用建立的间接ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞,经4-6次亚克隆,最终获得4株分泌抗GPV抗体的阳性杂交瘤细胞株,分别命名为1G3、2G8、3B8和3B11。亚类鉴定结果显示,1G3和3B11为IgG2b亚类,2G8和3B8为IgM类。其中1G3和3B11杂交瘤细胞在体外具有稳定分泌抗GPV单克隆抗体的能力,3B8不稳定。Western blot及间接免疫荧光显示,4株单抗均能与天然GPV结合。阻断结果表明,1G3和3B11能被小鹅瘟阳性血清阻断。本实验选用初步纯化rVP2-VLPs(杆状病毒系统表达的重组VP2病毒样粒子)作为包被抗原,GPV 1G3单克隆抗体作为检测抗体,建立了VP2-C-ELISA(竞争ELISA)检测方法,并对其进行优化,确定最佳反应条件。并对鹅细小病毒病毒样粒子免疫后的抗体水平进行监测,为鹅细小病毒病的快速诊断、疫情监测、流行病学调查和免疫抗体效价测定提供物质基础和技术支持。