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目的制备慢性皮肤溃疡大鼠模型,观察回阳生肌膏及其拆方对慢性皮肤溃疡大鼠创面愈合及相关因子的影响,初步探讨回阳生肌膏对慢性皮肤溃疡愈合的作用机制。方法1.30只SD雄性大鼠,随机分为3组：分别采用皮肤缺损(皮肤缺损组)、皮肤缺损+激素干预(皮肤缺损+激素组)和皮肤缺损+激素干预+细菌感染(皮肤缺损+激素+菌组)的方法制备皮肤溃疡,不给予药物治疗,观察造模后大鼠一般情况、创面表现和组织形态,记录每日创面面积,计算创面愈合率,比较激素干预和激素干预+细菌感染对创面愈合的影响情况。2.68只SD雄性大鼠,采用复合因素叠加(皮肤缺损+激素干预+细菌感染)的方法制备慢性皮肤溃疡模型,随机分为4组：模型组、全方组、温阳益气组和活血生肌组,模型组给予凡士林纱条,各给药组给予相应药膏纱条。其中44只,给药直至所有大鼠创面上皮化,共给药28d,观察大鼠一般情况、创面表现,记录每日创面面积和完全上皮化时间,计算创面愈合率和平均愈合时间。另外24只,连续给药7d,取肉芽组织,苏木素-伊红(HE)染色,做组织形态学观察。3.30只SD雄性大鼠,采用复合因素叠加的方法制备慢性皮肤溃疡模型,随机分为5组：对照组、模型组、全方组、温阳益气组和活血生肌组,对照组和模型组给予凡士林纱条,各给药组给予相应药膏纱条。连续给药7d,取血和肉芽组织,用酶联免疫方法(ELISA)检测血清中白细胞介素-1(IL-1)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,用免疫组织化学-石蜡切片方法(IHC-P)检测肉芽组织中血管内皮生长因子(VEGF)、血管内皮生长因子受体-2(VEGFR-2)、内皮型一氧化氮和酶(eNOS)和分化群34(CD34)的表达情况。结果1.复合因素叠加的造模方法与皮肤缺损和皮肤缺损+激素干预相比,能明显加重创面损伤程度,延长创面愈合时间。复合因素叠加方法制备的大鼠模型出现食少、便溏、体重下降,尾冷、嗜睡、活动减少等阳虚症状,创面颜色晦暗,分泌物腥臭,愈合时间延长。HE染色显示：皮肤缺损组创面有新生的表皮,结构完整,表皮层下可见成纤维细胞和炎性细胞散在分布,毛细血管丰富,胶原纤维较多；皮肤缺损+激素组创面有新生的表皮,但较薄,结构不完整,表皮层下成纤维细胞较少,毛细血管较丰富,胶原纤维较多；皮肤缺损+激素+菌组创面有新生的表皮,但未完全覆盖创面,表皮上有痂皮,其中炎性细胞聚集分布,痂皮下有组织液,真皮层中毛细血管和胶原纤维较少。2.创面愈合率,给药3d,全方组高于模型组(P<0.05)、温阳益气组(P<0.05)和活血生肌组(P<0.05)；给药7d,全方组、温阳益气组均高于模型组(P<0.01,P<0.05);给药11d,全方组、温阳益气组均高于模型组(P<0.01)和活血生肌组(P<0.01)；给药14d,模型组低于其他3组(P<0.01)。创面的平均愈合时间,模型组长于全方组(P<0.05)、温阳益气组(P<0.05)和活血生肌组(P<0.05)。开始出现上皮化时间,全方组最早,活血生肌组其次,温阳益气组和模型组最晚。所有创面全部上皮化时间,全方组最早,温阳益气组其次,模型组再次,活血生肌组最晚。3.HE染色显示：模型组创面没有新生的表皮,在真皮层炎性细胞聚集分布,成纤维细胞散在分布,毛细血管、胶原纤维较少；全方组大鼠创面有新生的角质层、棘层和基底层,基底层下成纤维细胞和炎性细胞散在分布,毛细血管丰富,胶原纤维较多,但形状较细,没有交织成网；温阳益气组创面有新生的基底层,其上覆有痂皮,痂皮下可见组织液,基底层下成纤维细胞和炎性细胞聚集分布,胶原纤维较多,但形状较细；活血生肌组创面有组织液和血浆形成的痂皮,其中炎性细胞聚集分布,痂皮下成纤维细胞聚集分布,毛细血管较丰富,胶原纤维较少。4.给药7d后,TNF-a浓度,模型组低于对照组(P<0.05),全方组低于模型组(P<0.05),温阳益气组与模型组比较没有统计学差异(P>0.05),活血生肌组低于模型组(P<0.05),全方组、活血生肌组均低于温阳益气组(P<0.05,P<0.01),全方组与活血生肌组比较没有统计学差异(P>0.05)；IL-1浓度,各组之间没有统计学差异(P>0.05)。5.给药7d后,VEGF蛋白表达量,模型组低于对照组(P<0.01),全方组高于模型组(P<0.05),温阳益气组、活血生肌组与模型组比较没有统计学差异(P>0.05),全方组与对照组比较没有统计学差异(P>0.05),温阳益气组、活血生肌组均低于对照组(P<0.01)和全方组(P<0.01)；VEGFR-2蛋白表达量,模型组低于对照组(P<0.05),全方组高于模型组(P<0.05),温阳益气组、活血生肌组与模型组比较没有统计学差异(P>0.05),全方组与对照组比较没有统计学差异(P>0.05),温阳益气组、活血生肌组均低于对照组(P<0.05),温阳益气组与全方组比较没有统计学差异(P>0.05),活血生肌组低于全方组(P<0.05)；eNOS蛋白表达量,模型组低于对照组(P<0.01),全方组高于模型组(P<0.05)、低于对照组(P<0.05),温阳益气组、活血生肌组与模型组和全方组比较均没有统计学差异(P>0.05),而均低于对照组(P<0.05)；CD34蛋白表达量,模型组低于对照组(P<0.05),全方组、温阳益气组均高于模型组(P<0.01),活血生肌组与模型组比较没有统计学差异(P>0.05),全方组、温阳益气组和活血生肌与对照组比较没有统计学差异(P>0.05),温阳益气组与全方组比较没有统计学差异(P>0.05),活血生肌组低于全方组(JP<0.05)。结论1.复合因素叠加方法制备的大鼠模型,阳虚症状明显,创面损伤程度较重,创面愈合时间明显延长,创面表现与中医临证“阴证疮疡”相接近,符合实验需要。2.回阳生肌膏及其拆方均能促进慢性皮肤溃疡大鼠创面愈合,且全方的功效优于温阳益气拆方和活血生肌拆方。3.回阳生肌膏可以降低慢性皮肤溃疡大鼠血清中TNF-α含量,减轻创面炎症反应,且这种作用与活血生肌药物关系密切。4.回阳生肌膏可以增加肉芽组织中VEGF、VEGFR-2和eNOS的蛋白表达,保护内皮细胞,促进血管生成；单独应用温阳益气拆方或活血生肌拆方,以上作用均不明显。