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抑郁症是目前常见的精神疾病之一,明显持久的、与处境不相符的心境低落是该病的主要临床特征,并伴有相应的认知和行为上的改变。本病具有发病率高、自杀率高等特点。目前针刺治疗抑郁症疗效显著且无副作用,因此,加强针刺对抑郁症的机制研究具有重大的临床意义和社会意义。目的本实验建立大鼠慢性温和不可预知应激(CUMS)模型,延续本课题组前期所做的关于针刺对抑郁症抗凋亡的研究,以SP600125阻断剂来特异性阻断c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路,通过检测JNK信号通路上的细胞凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2基因(bcl-2)及含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(caspase-12)在应激过程中的表达,观察海马脑区关键因子JNK的形态学变化,探究针刺通过作用于JNK信号通路的抗抑郁机制。方法1.实验动物及分组:随机将72只清洁级SD大鼠分为正常组、模型组、模型+二甲基亚砜(模型+DMSO)组、模型+阻断剂组(模型+SP组)、氟西汀组、氟西汀+阻断剂组(氟西汀+SP组)、电针组、电针+阻断剂组(电针+SP组)共8组,每组9只。2.处理方法:大鼠适应性饲养一周后,对需要注射溶剂和阻断剂组别的大鼠进行侧脑室套管埋置术,手术后恢复7d。正常组群居饲养,自由摄食水,不给予任何干预手段。电针组在造模前30min进行针刺治疗,氟西汀组在造模前30min进行灌胃给药;造模前1h对模型+DMSO组进行侧脑室注射DMSO溶剂,对模型+SP组、电针+SP组和氟西汀+SP组的侧脑室注射1 Oul/d稀释后的SP600125阻断剂。3.造模方法:套管埋置术后除正常组外,其余大鼠均采用国际公认的CUMS造模方法:单笼饲养,应用7种不可预知刺激方法(断食24h;断水24h;束缚2h;震荡30min;夹尾3 min;潮湿垫料24h;夜间光照12h)连续刺激21天,平均每种刺激各使用3次。4.套管埋置方法:参考前期研究进行如下操作,首先将大鼠用10%水合氯醛(0.3ml/100g)腹腔麻醉,然后将其固定于脑立体定位仪上,在颅骨的水平位使前囟点充分暴露。侧脑室定位:首先找到前囟点,在距离前囟后方0.9mm,左右1.5mm的地方用牙科钻头打孔,渗透颅骨。把注射套管用义齿基托树脂(牙托粉和牙托水混合物)涂抹周围将其固定。除向侧脑室注射药物时,其余时间注射套管均被套管帽覆盖。手术后恢复7d,在恢复期前三天需要注射青霉素避免术后感染,然后进行侧脑室阻断剂注射。5.干预方法:选取双侧“内关”、“三阴交”穴,用30号1寸毫针进行直刺,深度为0.3～0.5cm,左右“三阴交”穴连接HANSLH-202型电针仪,频率为2Hz,电流强度为0.6mA,针刺时以大鼠四肢微颤为宜,时间为20min/次;氟西汀用蒸馏水配成0.2mg/ml混悬液,按1.8mg/kg浓度灌胃。以上干预手段均在每天造模前进行,每天一次,共21天。侧脑室注射DMSO溶剂和SP600125溶液(溶解于DMSO溶液中,浓度为10mg/ml)时,注射剂量为10μl/d,从实验开始时隔天注射一次。6.检测方法:行为学检测:采用造模前和造模第21天体重增加量、糖水消耗实验评价抑郁模型大鼠行为学改变情况,来判断造模是否成功。关键指标检测:采用ELISA法检测大鼠海马和血清中caspase-12、bcl-2的含量表达;采用免疫组化法检测大鼠海马CA1区和CA3区的JNK表达情况。结果1.针刺对抑郁模型大鼠行为学的影响造模前:各组大鼠之间的糖水消耗量、体质量无明显差异,说明没有统计学意义(P>0.05),可以进行实验。造模第21天:与正常组比较,模型组大鼠体重增加量减少差异显著有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,模型+DMSO组、氟西汀+SP组差异均无统计学意义(P>0.05),模型+SP组、氟西汀组、电针组、电针+SP组差异显著有统计学意义(P<0.01);与氟西汀组比较,电针组大鼠体重增加量较大,但差异没有统计学意义(P>0.05)。与正常组比较,模型组糖水消耗量升高差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,模型+DMSO组、模型+SP组、电针组+SP组糖水消耗量减少差异具有统计学意义(P<0.05),氟西汀+SP组糖水消耗量显著减少(P<0.01),氟西汀组、电针组糖水消耗量降低但差异没有统计学意义(P>0.05);氟西汀组与电针组比较糖水消耗量没有显著性差异(P>0.05)。2.针刺对抑郁模型大鼠JNK信号通路关键分子的影响与正常组比较,模型组大鼠海马caspase-12蛋白表达明显上升差异显著具有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,模型+DMSO组、模型+SP组、氟西汀组、氟西汀+SP组、电针组、电针+SP组大鼠海马caspase-12蛋白表达均下降差异显著有统计学意义(P<0.01);与氟西汀组与电针组比较差异没有统计学意义(P>0.05)。与正常组比较,模型组大鼠血清caspase-12蛋白表达降低;与模型组比较,模型+DMSO组、模型+SP组、氟西汀组、电针+SP组大鼠血清caspase-12蛋白表达降低,而氟西汀+SP组、电针组大鼠caspase-12表达升高,但差异均没有统计学意义(P>0.05)。与正常组比较,模型组大鼠海马bcl-2蛋白表达明显降低(P<0.01);与模型组比较,模型+DMSO组表达升高(P<0.05),模型+SP组、氟西汀组、氟西汀+SP组、电针组、电针+SP组大鼠血清bcl-2蛋白表达明显升高,差异显著(P<0.01);氟西汀组与电针组比较差异不明显没有统计学意义(P>0.05)。与正常组比较,模型组大鼠血清bcl-2蛋白表达明显下降(P<0.01);与模型组比较,模型+DMSO组、模型+SP组差异没有统计学意义(P>0.05),氟西汀组、电针+SP组大鼠海马bcl-2蛋白表达均上升差异有统计学意义(P<0.05),氟西汀+SP组、电针组表达明显上升差异显著有统计学意义(P<0.01);氟西汀组与电针组比较差异不明显没有统计学意义(P>0.05)。与正常组比较,模型+DMSO组大鼠海马CA1区JNK表达明显升高,差异具有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,模型+DMSO组CA1区JNK表达明显升高(P<0.01);与模型+DMSO组比较,氟西汀组、氟西汀+SP组、电针组表达明显下降,差异显著具有统计学意义(P<0.01);与电针组比较,氟西汀组JNK表达下降但差异没有统计学意义(P>0.05)。与正常组比较,模型+DMSO组大鼠海马CA3区JNK表达显著升高,差异具有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,模型+DMSO组CA3区JNK表达明显升高(P<0.01);与模型+DMSO组比较,模型+SP组、氟西汀组、氟西汀+SP组、电针组、电针+SP组表达明显著下降,差异具有统计学意义(P<0.01);与电针组比较,氟西汀组JNK表达下降但差异没有统计学意义(P>0.05)。结论1.行为学结果说明慢性不可预知性应激导致大鼠体重增加量下降,经过电针和氟西汀干预后得到改善。2.电针对大鼠体重增加量下降的作用,可能是电针、氟西汀通过抑制JNK、caspase-12 和激活 bcl-2 的蛋白活性实现的,并且电针和氟西汀干预对于抑郁模型大鼠的中枢作用比外周血清明显。3.电针和氟西汀干预手段对抑郁模型大鼠行为学改善的效果没有显著差异。