脑卒中(stroke)是指急性脑血管病,急性发生的血管或血液异常导致脑部血液循环障碍因而发生的神经功能缺损综合征。包括缺血性脑卒中、脑出血和蛛网膜下腔出血等,其中缺血性脑卒中约占各种脑卒中疾病的60%-80%。在我国,脑血管病已成为城市和农村人口的第一位致残和死亡原因。随着人口老龄化和经济水平的快速发展及生活方式的不断转变,脑卒中已成为威胁中老年人健康的主要疾病之一。柿叶为柿属(Diospyros L.)植物柿(Diospyros kaki L. f)的新鲜或干燥叶片。味苦、性寒,其入药始载于明代《滇南本草》日“经霜叶敷臃疮”。柿叶具有清热解毒、润肺强心、镇咳止血、抗癌防癌等多种功效,具有保护心脑血管系统、抗癌、抗氧化、抗菌、止血等生理活性,且有低毒性的特点。本研究通过对柿叶不同化学部位的制备、分离和活性筛选,得到治疗缺血性卒中的柿叶有效部位,并探讨其对局灶脑缺血再灌注损伤的保护机制,分析柿叶有效部位对NO释放以及MAPK信号通路的作用,为抗缺血性卒中候选新药的研发提供科学依据,方法与结果概括如下：1.柿叶粗提工艺的考察和筛选分别用不同浓度的乙醇及纯净水提取得到柿叶粗提物,利用高效液相色谱和液质联用技术比较分析各粗提物中的化学成分,采用八种不同的细胞模型和PT、APTT、TT等凝血功能指标对粗提物进行高通量筛选和体外活性筛选,确定以75%乙醇提取作为柿叶的粗提工艺。柿叶粗提物中主要含p-谷甾醇、芦丁、黄芪苷、苹果酸、山柰素、杨梅树皮苷等化合物。2.柿叶不同化学部位的制备和有效部位的初筛利用大孔吸附树脂分离柿叶75%乙醇提取物,不同浓度乙醇梯度洗脱得到五个化学部位。采用五种不同的细胞模型和PT、APTT、TT等凝血功能指标,对不同化学部位及其配伍进行高通量筛选和药理活性考察。初步确定以Fr2+Fr3部位组合(即10%-50%乙醇洗脱部位)作为柿叶抗缺血性卒中有效部位,主要含金丝桃苷、异槲皮素、黄芪苷、槲皮素、山柰素等化合物。3.柿叶有效部位的药效学评价及急性毒性实验柿叶有效部位能改善MCAO模型大鼠的损伤神经功能障碍(P<0.001),缩小脑梗死面积(P<0.001),减轻脑水肿程度(P<0.001),提高脑组织中SOD活性(P<0.001),降低MDA含量(P<0.001)；对高分子右旋糖苷致大鼠软脑膜微循环障碍模型,柿叶有效部位能显著增加BPU值(P<0.01),明显抑制脑组织中谷氨酸浓度(P<0.01)、NOS的活性(P<0.01)及Ca2+含量(P<0.01)；对大鼠心肌缺血再灌注损伤模型,柿叶有效部位显著降低大鼠心律失常程度(P<0.01),缩小心肌梗死范围(P<0.001),抑制AST (P<0.05)、LDH (P<0.01)和CK-MB活性(P<0.001),升高血清中SOD活性(P<0.01)和GSH浓度(P<0.001),显著降低MDA (P<.001)、NO (P<0.01)含量；对大鼠电刺激性颈动脉血栓形成模型,柿叶有效部位显著延长电刺激引起的动脉血栓形成时间(P<0.01),升高血清中PGI含量(P<0.01),降低血栓的基质蛋白和血清中TXA2含量(P<0.01)；对高粘血症模型大鼠,柿叶有效部位明显抑制高分子右旋糖苷引起的全血黏度、血浆粘度和血清粘度(P<0.001),抑制红细胞沉降速率增高(P<0.01)和红细胞比积的下降(P<0.001)。急性毒性实验表明,柿叶有效部位在临床等效剂量450倍时对小鼠无明显急性毒性。4.柿叶有效部位抗缺血性卒中的作用机制研究利用RT-PCR法测定脑缺血再灌注后脑组织中iNOS、nNOS、eNOS mRNA的表达；采用Western Blot技术,考察大鼠脑皮质和海马组织中ERK1/2和p38在脑缺血再灌注损伤后的变化,以及有效部位对此变化的影响。柿叶有效部位可增加大鼠脑组织eNOS mRNA的表达(P<0.05),并且降低iNOS mRNA和nNOS mRNA表达(P<0.05),进而影响脑组织中不同作用NO的含量；增加大鼠脑组织ERK1/2信号通路在脑缺血再灌注后的激活(P<0.05),抑制p38信号通路在脑缺血再灌注后的激活(P<0.05)。综上所述,利用大孔吸附树脂富集75%乙醇柿叶提取物,以10%-50%乙醇洗脱得到的化学部位具有较好的抗缺血性卒中活性；并且,能够通过调节一氧化氮合酶的表达和丝裂原活化蛋白激酶的激活保护缺血再灌注损伤脑组织。该化学部位为柿叶抗缺血性卒中有效部位,具有较好的临床应用前景。