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背景:胆汁淤积是正常的胆汁流被损害或阻断,胆汁酸和其他有害物质在肝脏中过度蓄积而引发的肝损伤。它是多种疾病的组成部分,如:胆石症、妊娠肝内胆汁淤积症、原发性胆汁性肝硬变和原发性硬化性胆管炎等。近年来研究发现定位于肝细胞膜窦面和微胆管面上的转运体对维持正常的胆汁流和肝脏功能起着重要作用。大黄素即1,3,8-三羟基-6-甲基蒽醌,是从已广泛用于临床治疗淤胆型肝炎的传统中药大黄根茎提纯的一种蒽醌类衍生物,具有广泛的药理学作用,如:抗炎、抗病毒、抑菌、免疫调节和肝保护等。推测大黄素能缓解胆汁淤积可能与调节肝细胞膜上转运体基因的表达有关。第一部分:大黄素对肝内胆汁淤积大鼠的保护作用目的:探讨大黄素对α-萘异硫氰酸酯(ANIT)致急性肝内胆汁淤积的保护作用。方法:采用ANIT灌胃制备大鼠急性肝内胆汁淤积病理模型。将32只大鼠随机平均分为正常组、正常+大黄素组、模型组和模型+大黄素组。造模前,模型+大黄素和正常+大黄素组给予大黄素40mg/kg/d灌胃,正常组及模型组给予羧甲基纤维素钠处理,均持续到处死动物之前,于实验第5天给药后4小时,模型组和模型+大黄素组100mg/kg ANIT灌胃1次建立模型,其余两组予以橄榄油对照处理,建模后48小时处死动物,收集标本。观察各组实验动物肝功能各项生化指标TBiL, DBiL, ALT , AST , ALP和TBA的变化和肝脏组织病理学改变。结果:(1)模型组与正常组比较,TBiL,DBiL,ALT,AST,ALP和TBA浓度明显增高(P<0.01);光镜下可见肝细胞变性和坏死、中性粒细胞浸润。(2)模型+大黄素组与模型组比较,TBiL, DBiL, ALT, AST,ALP和TBA均降低(P<0.01或P<0.05);组织病理学改变轻微。(3)正常+大黄素组与正常组比较上述各指标均无显著变化(P>0.05)。结论:大黄素能明显降低胆汁淤积大鼠血清中TBiL,DBiL,ALT,AST,ALP和TBA浓度,显著降低胆汁酸的毒性作用,抑制肝损伤。第二部分:大黄素对大鼠肝内胆汁淤积相关转运体基因表达的研究目的:探讨大黄素治疗大鼠急性肝内胆汁淤积的作用机制。方法:采用ANIT灌胃制备大鼠急性肝内胆汁淤积病理模型,将32只大鼠随机分为正常组、正常+大黄素组、模型组和模型+大黄素组,采用实时荧光定量RT-PCR检测肝细胞膜转运蛋白基因胆盐输出泵(BSEP)、多药耐药相关蛋白2(MRP2)、钠-牛磺胆酸共转运蛋白(NTCP)、多药耐药蛋白2(MDR2)、多药耐药蛋白1a(Mdr1a)、多药耐药蛋白1b(Md1rb)、多药耐药相关蛋白3(MRP3)和核受体法尼酯衍生物X受体(FXR)mRNA水平的表达,Western blot方法检测肝脏P-糖蛋白(P-gp)的变化。结果:(1)模型组与正常组比较,在mRNA水平NTCP和FXR表达降低(P<0.01),MDR2, Mdr1b和MRP3表达增高(P<0.01或P<0.05),BSEP,Mdr1a和MRP2表达无显著差异(P>0.05);在蛋白水平P-gp表达增高(P<0.05)。(2)模型+大黄素组与模型组比较, NTCP,MDR2,Mdr1a,Mdr1b和MRP3 mRNA水平表达高于模型组(P<0.01或P<0.05),但BSEP, MRP2和FXR的表达无显著差异(P>0.05);P-gp表达同时也高于模型组(P<0.05)。(3)正常+大黄素组与正常组比较上述各指标均无显著变化(P>0.05)。结论:大黄素通过上调肝脏中与胆汁酸代谢相关的转运蛋白MRP3和P-gp的表达以减少胆汁酸及其他有毒化合物在肝脏中的蓄积可能为其退黄、恢复肝脏功能的作用机制之一