【摘 要】
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桑黄为药用野生真菌,富含多糖、黄酮、三萜、甾醇、纤维素酶等多种活性物质,具有抗菌、抗肿瘤、调节免疫等功效。目前关于桑黄的研究主要集中在菌丝的人工栽培与发酵培养技术以及药理作用研究,对于子实体的研究则多集中于多糖和蛋白糖的分析方面。鉴此,本论文对长白山区野生桑黄菌株进行了分离筛选及固体栽培条件的优化,然后进行了利于桑黄菌丝体中多酚类化合物累积的液体发酵培养条件的优化和基于大鼠炎症模型的桑黄活性成分的
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桑黄为药用野生真菌,富含多糖、黄酮、三萜、甾醇、纤维素酶等多种活性物质,具有抗菌、抗肿瘤、调节免疫等功效。目前关于桑黄的研究主要集中在菌丝的人工栽培与发酵培养技术以及药理作用研究,对于子实体的研究则多集中于多糖和蛋白糖的分析方面。鉴此,本论文对长白山区野生桑黄菌株进行了分离筛选及固体栽培条件的优化,然后进行了利于桑黄菌丝体中多酚类化合物累积的液体发酵培养条件的优化和基于大鼠炎症模型的桑黄活性成分的抗炎作用研究。首先,采用组织分离法从野生桑黄中提取菌种,确定桑黄的固体栽培条件。桑黄菌丝的分离纯化培养基为PDA,生长时间为15 d,培养温度为26-30℃,含水量为60-65%。二级菌种的培养基为麦粒培养基,子实体的生长最适温度为夜间不低于15℃,白天不高于26℃,最佳培养木段为柞树段。其次,为了解决桑黄木段栽培中所需条件苛刻、生物学效率低、难于实现规模化生产的弊端,摸索了真菌的深层发酵技术。采用L9(34)正交实验的方法对培养基进行优化,并采用单因素实验对桑黄液体发酵培养条件进行考察,确定了有利于桑黄菌丝体中多酚类化合物累积的液体发酵工艺条件。结果表明,在培养基配比为玉米粉2.5%+葡萄糖20 g,蛋白胨2%,磷酸二氢钾0.10%,硫酸镁0.2%条件下,培养基初始pH为5.0、培养温度为30℃、摇床转速200 r/min、接种量为20%、装样量为100 mL、培养周期72 h时,所得到的桑黄菌丝体中多酚含量最高,产率为1.58%。最后,选择桑黄所含的多糖类活性物质,对炎症大鼠进行了抗炎实验,并初步对其抗炎药理作用机制进行探讨。实验表明,海藻糖二水化合物具有一定的抗炎作用,存在剂量效应关系,当灌注10 mg/mL海藻糖溶液的炎症大鼠与生理盐水相比较大鼠左爪热刺激和机械刺激明显增加,灌注100 mg/mL海藻糖溶液的炎症大鼠与生理盐水相比较,大鼠右爪对不同的刺激表现不同的变化,而灌注50 mg/mL海藻糖溶液的炎症大鼠与灌注生理盐水相比较大鼠左爪和右爪机械刺激均显著增加,此时抗炎活性效果最佳。
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