论文部分内容阅读
在研制adr亚型重组汉逊酵母乙型肝炎疫苗（adr亚型HBsAg作为疫苗的主要有效组分）过程中,以小鼠半数有效剂量(ED50)法和体外相对效力（RP）法检测在研adr亚型重组汉逊酵母乙型肝炎疫苗的实验室效力。ED50是反映疫苗诱导机体产生特异性抗体的能力,即疫苗的免疫原性;RP反映疫苗关键有效成分HBsAg与特异性抗体结合的能力,即疫苗的反应原性。通过对两种方法进行试验及相关验证,初步评价并探讨两种方法的相关性,为在研疫苗实验室效力检测方法的确立提供参考依据。小鼠半数有效剂量(ED50)法试验中,选用BALB/c小鼠与NIH小鼠分别进行试验。分次检测试验结果显示,BALB/c小鼠试验的敏感性及稳定性较好。对多次试验结果进行统计学分析,结果表明BALB/c小鼠与NIH小鼠检测在研疫苗ED50没有统计学差异（P>0.05）,说明可选用两个品系的小鼠检测ED50。体外相对效力（RP）法,以重组酵母乙型肝炎疫苗国家参考品（SC参考品）和adr亚型乙型肝炎表面抗原实验室内部参考品（HP参考品）为标准,采用酶联免疫法（ELISA）和电化学发光法（ECLIA）,对不同批次adr亚型重组汉逊酵母乙型肝炎试验疫苗进行检测试验,比较两种方法及两种参考品有无差异。通过对ELISA法和ECLIA法检测的准确性、精密性（试验内、试验间）进行一系列验证试验,结果显示ECLIA法的准确性、精密性均好于ELISA法,证明ECLIA法可作为检测在研疫苗RP的首选方法。对ECLIA法检测不同批次样品RP值的多次试验结果进行统计学分析,结果显示选用两种参考品作为标准检测样品RP有统计学差异（P<0.05）。分析RP法与ED50法检测参考品和样品的试验结果,显示两种方法所测的RP值和ED50值总体的变化趋势与理论相一致,即试验疫苗的体外相对效力与小鼠半数有效剂量具有对应性,但二者直接相关性不强。在参考品和样品稳定性试验中,对RP法与ED50法检测样品的结果分析也说明RP值和ED50值总体的变化趋势较一致,即随加热处理（37℃）时间的增加,RP值和ED50值均有下降,但是RP值的变化较小,变异系数在0.9%-5.8%之间,而ED50值变异系数在10.6%-45.1%之间,变化较大。RP法与小鼠ED50法比较,有较好的准确性、精密性及试验周期短等优点,且可以反映参考品和试验疫苗的效力,总体上与动物试验的结果有对应性,可以作为在研重组汉逊酵母乙型肝炎疫苗实验室效力放行检测的主要方法。