黄瓜生长迟缓突变基因dl的克隆

来源 :西北农林科技大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:youqing_2009
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植株的生长调控问题一直是植物研究领域的热点问题之一。该问题的研究对于理解植物生长调控机理、培育合理株型品种等方面具有理论价值和实践意义。本研究采用正向遗传学方法,对一个黄瓜(Cucumis sativus L.)生长迟缓自发突变体delayed growth(dl),进行表型鉴定、基因定位和基因功能分析等研究。研究结果表明:1.dl突变体与已报道的de、cp、scp、scp-1、scp-2等黄瓜矮化(或者紧凑)突变体存在明显差别。dl突变体生长迟缓、根系生长受到抑制,叶片增厚、粗糙不平,叶色深绿,下胚轴缩短。成株期植株形态基本正常,仍然保留无限生长特征,可以持续生长,内源GA含量与野生型无差异,外源喷施GA能显著恢复突变表型;2.对dl基因进行遗传分析和分子标记定位表明,本研究中的生长迟缓表型是由一对细胞核基因控制的隐性突变,dl基因位于黄瓜1号染色体的179 kb区间内,两侧标记分别是UW023976、UW024036,区间内,预测候选基因是CsIREH1;3.CsIREH1基因DNA编码区包含17个外显子,基因CDS全长3897bp,预测编码含有1298个氨基酸的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶。与野生型基因相比,基因编码区发生倒位突变,导致CsIREH1基因中一个8308bp的DNA片段发生了倒位,使其CDS第3-9号外显子缺失,形成突变Csireh1基因。Csireh1基因CDS全长1593bp,编码530个氨基酸,缺失了丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶活性中心位点及多个重要基序;4.CsIREH1基因在植物各器官内广泛表达,以顶芽中的表达最为强烈,可能参与多个生长代谢途径,在细胞生命活动和顶端生长中起到重要作用。亚细胞定位结果显示,原生质体和细胞壁中均能检测到CsIREH1-GFP融合蛋白荧光信号,表明CsIREH1在细胞内具有广泛的功能,还可能参与细胞骨架的装配和细胞壁的修饰过程。
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