斑嘴鸭源新城疫病毒的分离鉴定及分子生物学特性的研究

来源 :扬州大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:shawn200904
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
新城疫(Newcastle disease,ND)仍然是威胁养禽业的一种主要疾病,给养禽业造成巨大的损失,国际兽医局(Office Internation des Epizooties,OIE)将其与高致病性禽流感一起列为危害养禽业的必须报告的疾病。自1997年以来,华南和华东地区部分省市发生了新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)感染鹅的病例,虽然各地采取了积极的防治措施,但该病仍然逐渐蔓延、流行。有不少学者对此进行了研究,但有关病原的生物学特性及流行病学等方面,仍存在很多疑问。 1、斑嘴鸭源新城疫病毒的分离纯化与毒力鉴定 本研究从盐城国家自然保护区的斑嘴鸭群中,采集肛拭子,经实验室常规处理接种鸡胚,收集24h后致死鸡胚的尿囊液,采用病毒蚀斑纯化技术纯化病毒,结果分离获得三株病毒:通过透射电镜观察,新分离病毒呈典型的新城疫病毒粒子的形态结构:以抗NDV鸡多抗血清为一抗作间接免疫荧光试验(IFA),结果观察到特异性的亮绿色荧光,证明该病毒为新城疫病毒,分别命名为7XJS061、8XJS062、12JS063。用这些病毒接种鸡胚,结果鸡胚死亡,胚体全身出血。病毒的主要致病指数如鸡胚平均死亡时间(MDT)、1日龄雏鸡脑内接种指数(ICPI)及组织培养半数感染量(TCID<,50>)的检测结果表明,3株病毒的MDT分别为52h、48h、46h,ICPI为1.523(L2JS063),TCID<,50>分别为10<5.625>/0.1ml、10<7.25>/0.1ml、10<8.625>/0.1ml。试验结果证明来源于野生斑嘴鸭的3株NDV为新城疫强毒。 2、斑嘴鸭源新城疫病毒融合蛋白(Fusion protein)基因的克隆及序列分析 根据Genbank上己发表的NDV F基因序列设计一对扩增F基因的引物,用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增,并经克隆和测序,结果获得了野鸭源NDV7XJS061、8XJS062、L2JS063 F基因约1662bp的片段,序列分析结果表明,3株野鸭源NDV F蛋白的裂解序列为<112>R/K-R-Q-K/R-R-F<117>,与NDV强毒株的特征一致。对获得的3株野鸭源病毒F基因的序列与Genbank上发表的鹅源、鸡源、鸭源等病毒的F基因的相应序列进行比较,结果7XJS061、8XJS062、L2JS063与鹅源病毒ZJ1株之间的同源性为97.5%-97.6%,与鸭源病毒semi-muscovy duck FMl株之间的同源性为84.3%-84.4%,与鸡源标准弱毒株LaSota的同源性为84.5%,与鸡源强毒株F48E9株的同源性为97.5-97.6%,与猪源swine SP13株的同源性为84.5%-84.6%,与Ch983的同源性为98.1%-98.2%。本研究表明,斑嘴鸭源NDV可能与同期或稍早期的鸡源NDV流行有密切的关系。 3、斑嘴鸭源新城疫病毒血凝素-神经氨酸酶基因C-末端部分片段的克隆及序列分析 根据Genbank上已发表的NDV血凝素-神经氨酸酶基因C-末端基因的部分片段基因序列设计三条扩增HN C-末端基因的引物,用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术扩增分离株血凝素-神经氨酸酶基因C-末端基因的部分片段,经克隆测序,获得约340bp的片段,序列分析结果显示,3株病毒的终止密码子在同一位置,且与标准强毒株F48E8的终止密码子位置相同,但比标准弱毒株Lasota的HN少18个碱基,说明3株野鸭源病毒为强毒株,而且可能来源于鸡群内同期或稍早期的NDV强毒株。
其他文献
摘 要:如何帮助孩子形成稳定的阅读兴趣,激发学生的阅读兴趣,本文结合自己的教学实践就此展开了论述。  关键词:阅读兴趣 读书会 阅读心理 体验成功    我国著名的语言大师吕叔湘曾说过:“问语文学得好的人,无一不得力于课外阅读。”由此可见,课外阅读对于语文水平的提高有着极其重要的意义。小学阶段被称为“黄金教育期”或“饥渴期”,这个年龄段的孩子迫不及待地学习任何事物。在这个阶段,作为教师及父母如果正
现在教育学不仅要求教师对学生进行合理的分层式教育,还要对学生的核心素质教育进行培养与重视.本文主要讨论了核心素质教育下高中物理的分层式教育,主要从"分层教育下对学生
随着信息技术的迅猛发展以及教育事业的进步,将信息技术运用于高中数学教学中成为必然趋势,互联网信息技术的引用使得高中数学教学效率和质量都有了很大提升,促进了高中生的
新课程改革更加注重对学生阅读能力的培养,核心素养背景下,学生在英语的学习过程中需要能够更加主动地参与到学习的过程中,让学生成为学习的主人.本文就对高中英语阅读教学中
流感病毒现已遍布世界各地,因猪的种间屏障较低,易形成“人-猪-禽”的传播链,并在此期间发生基因重配,产生新的基因型,威胁公共卫生安全。本研究通过应用RT-PCR和鸡胚接种的
学生的学习过程不是教师将知识进行简单的传递,而是学生自我建构知识的过程.由于学习能力的差异,很多学生在知识建构过程中会产生困难,失去学习兴趣.在学生进行前置性学习时,
小学英语是学生学习的主要科目,小学也是学生打好基础的关键时期,那么在这一过程中教师要有意识地对学生的兴趣进行开发,运用游戏的方法来刺激学生的学习热情,提高学生学习的