论文部分内容阅读
目的运用蛋白质组学双向凝胶电泳和质谱技术，研究子宫内膜癌组织与正常子宫内膜组织蛋白质组表达图谱的差异，寻找和确定子宫内膜癌差异表达蛋白质，分析其中与子宫内膜癌相关蛋白质，为进一步研究子宫内膜癌的发生发展机制奠定基础。方法1、双向凝胶电泳分离子宫内膜癌组织与正常子宫内膜组织的总蛋白。2、用ImgemMster图像分析软件检测双向电泳实验的重复性和差异表达蛋白。3、应用质谱鉴定所筛查的差异表达蛋白。4、应用RT-PCR技术对筛选出的部分差异表达蛋白在mRNA水平进行验证。结果1、获得稳定的高分辨率和重复性的子宫内膜癌组织与正常子宫内膜组织双向电泳图谱。测得子宫内膜癌组织与正常子宫内膜组织各3块凝胶的平均蛋白质点数分别为1556±38和1657±31。2、子宫内膜癌组织与正常子宫内膜组织相比较，经双向凝胶电泳软件分析，共找到27个差异表达的蛋白质，其中22个蛋白质在子宫内膜癌组织中含量增加，5个蛋白质含量减低。3、对差异蛋白质进行质谱鉴定，质谱鉴定出15种与子宫内膜癌相关的差异蛋白质，其中13种在子宫内膜癌组织中表达上调的蛋白质为p48，烯醇酶，ATP合酶，膜联蛋白，蛋白质延长因子1-α1，Unknown(protein for IMAGE：3897065)，硫氧还蛋白过氧化物酶6，加帽蛋白Cap G，焦磷酸酶1，过氧化物歧化酶突变体Q143n，蛋白质二硫化物异构酶A3(PDIA3)前体，丙酮酸激酶M1／M2，亮氨酸氨基肽酶，2种在子宫内膜癌组织中表达下调的蛋白质为Stathmin 1，α1-抗胰蛋白酶。4、通过RT-PCR技术在基因水平对p48，烯醇酶，ATP合酶，膜联蛋白，蛋白质延长因子1-α1，Stathminl这6个蛋白质的mRNA表达水平进行验证，结果与质谱结果一致。结论1、应用蛋白质组学研究方法筛选鉴定出15种与子宫内膜癌癌变相关的蛋白质，这些蛋白涉及能量代谢相关的多种酶、抗氧化相关蛋白、细胞增殖调控蛋白以及分子伴侣等。进一步阐明了肿瘤发生发展过程中既存在促进肿瘤生长的正向环境，也存在对其清除抵抗的防御反应，从而为下一步寻找子宫内膜癌诊断和治疗标志物提供了参考依据。2、发现的差异蛋白质可能在子宫内膜癌癌变过程中起重要作用，其作用机理仍有待于今后进一步研究。