【摘 要】
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目的:通过研究二氢青蒿素（Dihydroartemisinin,DHA）对人T细胞淋巴瘤细胞（Jurkat、HuT 78）PTEN基因表达和AKT蛋白磷酸化的影响,探讨二氢青蒿素抗T细胞淋巴瘤的作用。方法:按照常规细胞培养方法培养人T细胞淋巴瘤细胞Jurkat细胞和HuT 78细胞,在细胞处于对数生长期时,选取生长状态良好且无污染的细胞进行后续实验。使用二氢青蒿素分别干预Jurkat细胞和HuT
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目的:通过研究二氢青蒿素（Dihydroartemisinin,DHA）对人T细胞淋巴瘤细胞（Jurkat、HuT 78）PTEN基因表达和AKT蛋白磷酸化的影响,探讨二氢青蒿素抗T细胞淋巴瘤的作用。方法:按照常规细胞培养方法培养人T细胞淋巴瘤细胞Jurkat细胞和HuT 78细胞,在细胞处于对数生长期时,选取生长状态良好且无污染的细胞进行后续实验。使用二氢青蒿素分别干预Jurkat细胞和HuT 78细胞后,（1）应用CCK-8法检测细胞增殖率并计算IC50值;（2）在光学显微镜下观察细胞的数量与形态变化;（3）利用流式细胞术检测细胞凋亡;（4）使用实时荧光定量PCR法检测两种细胞内PTEN mRNA表达,将GAPDH作为内参,利用2-ΔΔCt法计算PTEN mRNA的相对表达量;（5）利用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测两种细胞内PTEN、AKT、p-AKT蛋白的表达,使用GAPDH作为内参,应用Image J软件进行灰度值分析,计算PTEN、AKT、p-AKT蛋白的相对表达量。结果:（1）CCK-8法检测结果显示,二氢青蒿素抑制人T细胞淋巴瘤细胞Jurkat细胞和HuT 78细胞的增殖效果与其浓度呈正相关,二氢青蒿素干预人T细胞淋巴瘤细胞Jurkat细胞和HuT 78细胞48h,IC50值分别为34.19μM和38.76μM,与对照组相比,差异有统计学意义（P<0.05）;（2）使用浓度为40μM的二氢青蒿素溶液干预人T细胞淋巴瘤细胞Jurkat细胞和HuT 78细胞48h后,使用光学显微镜观察,在低倍镜中可看到培养瓶中的两种人T细胞淋巴瘤细胞的密度明显降低,产生的细胞碎片显著增多,在高倍镜下可看到细胞膜完整性被破坏、细胞结构不规则;（3）使用浓度为40μM的二氢青蒿素溶液干预人T细胞淋巴瘤细胞Jurkat细胞和HuT 78细胞48h后,两种细胞的凋亡率分别增加72.92%（Jurkat）和61.66%（HuT 78）,与对照组相比,差异有统计学意义（P<0.05）;（4）使用浓度为40μM、80μM的二氢青蒿素干预人T细胞淋巴瘤细胞Jurkat细胞和HuT 78细胞48h后,与对照组相比,两种细胞内的PTEN mRNA相对表达量分别增加1.91倍（Jurkat）和1.82倍（HuT 78）,差异有统计学意义（P<0.05）;（5）使用浓度为40μM、80μM的二氢青蒿素分别干预Jurkat细胞48h后,Jurkat细胞内PTEN蛋白表达量分别增加2.31倍和4.15倍,与对照组相比,差异有统计学意义（P<0.05）,AKT蛋白表达量分别下降4%和8%,与对照组相比,AKT蛋白表达几乎没有变化（P>0.05）,p-AKT蛋白表达量分别下降18%和37%,与对照组相比,差异有统计学意义（P<0.05）;使用浓度为40μM、80μM的二氢青蒿素分别干预HuT 78细胞48h后,HuT 78细胞内PTEN蛋白表达量分别增加2.15倍和3.53倍,与对照组相比,差异有统计学意义（P<0.05）,AKT蛋白表达量分别下降5%和7%,与对照组相比,AKT蛋白表达几乎没有变化（P>0.05）,p-AKT蛋白表达量分别下降19%和31%,与对照组相比,差异有统计学意义（P<0.05）。结论:二氢青蒿素（Dihydroartemisinin,DHA）明显抑制人T细胞淋巴瘤细胞Jurkat细胞和HuT 78细胞的细胞增殖,促进细胞凋亡;二氢青蒿素在转录和翻译水平通过上调PTEN mRNA水平增加PTEN蛋白表达,使下游AKT蛋白的磷酸化受到抑制;二氢青蒿素通过调控PTEN/AKT信号通路,发挥抗T细胞淋巴瘤的作用。本研究所取得的实验结果,为临床治疗T细胞淋巴瘤提供了新的研究思路。
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